تهیه کونژوگه پلی ساکارید PRP هموفیلوس آنفلوآنزا تیپ b با اگزوتوکسین A سودوموناس آئروژینوزا و سنجش ایمنی زایی آن در مدل حیوانی

تهیه کونژوگه پلی ساکارید PRP هموفیلوس آنفلوآنزا تیپ b با اگزوتوکسین A سودوموناس آئروژینوزا و سنجش ایمنی زایی آن در مدل حیوانی فهرست مطالب عنوان صفحه چکیده فارسی15 مقدمه هموفیلوس آنفولانزا17 میکروبیولوژی19 دسته‌بندی سویه های هموفیلوس آنفلوآنزا قابل تیپ بندی20 کلون سازی و تهاجم22 1-2-4 کلون‌سازی در مجرای تنفسی فوقانی22 1-3-4 حمله به اپیتلیوم..........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................23 1-4-4 حمله به جریان خون.........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................24 1-5-4 بقا در جریان خون....................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................25 1-6-4 حمله به CNS..................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................26 1-1-5 شاخص‌های بیماری زایی هموفیلوس آنفولانزا...........................................................................................................................................................................................................................................27 1-2-5 OMPs.................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................28 1-3-5- پیلی...........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................28 1-4-5- ایمونوگلوبولین A1 پروتئاز.....................................................................................................................................................................................................................................................................................................................30 1-5-5- لیپوپلی ساکارید (LPS) ...................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................31 1-6-5- نقش LPS در بیماری‌زایی........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................32 1-1-6 کپسول.........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................34 1-2-6- دخالت کپسول در بیماری‌زایی..........................................................................................................................................................................................................................................................................................................36 1-3-6- ژنتیک بیان کپسول.........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................36 1-1-8 روشها و آزمونهای تشخیص آزمایشگاهی...............................................................................................................................................................................................................................................38 1-2-8 روشهای تشخیص کلاسیک.........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................38 1-3-8- معایب تشخیص کلاسیک...............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................39 1-4-8- برتری روشهای تشخیص مولکولی.................................................................................................................................................................................................................................................................................40 1-1-9- اپیدمیولوژی ........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................40 1-1-10- پیشگیری .............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................44 1-1-11- درمان....................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................45 2-1 واکسن های کونژوگه.......................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................48 2-2- واکسن‌های Hib......................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................49 2-3- پاسخ های واکسن کونژوگه.........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................50 2-4- پاسخ های واکسن پلی‌ساکاریدی..............................................................................................................................................................................................................................................................................................................51 2-5- عوامل دخیل در ایمونوژنسیتی واکسن های کونژوگه پلی ساکاریدی – پروتئینی....................................................................................................51 2-5-1- طول زنجیره پلی ساکاریدی .......................................................................................................................................................................................................................................................................................................................51 2-5-2- نوع اتصال......................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................52 2-5-3- مولکول های حامل ...................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................52 2-6-EDC یا EDAC.................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................52 2-7- کونژوگاسیون به روش آمیداسیون ......................................................................................................................................................................................................................................................................................................53 2-8- تهیه کونژوگه ایمونوژن هاپتن1 – حامل....................................................................................................................................................................................................................................................................................54 2-9- پروتئین های حامل مناسب برای ایجاد کونژوگه های آنتی ژنیک.......................................................................................................................................................................55 2-10- ادجوانت های مناسب در طراحی واکسن کونژوگه..............................................................................................................................................................................................................................56 2-11- سنجش فعالیت باکتری کشی.............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................56 فصل سوم- مواد و روش ها 3-1-1 مواد و وسایل لازم .....................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................60 3-2-1- تهیه میکروارگانیسم های به کار گرفته شده در این مطالعه........................................................................................................................................................................................66 3-2-2-باز کردن سویه باکتری همو فیلوس آنفولانزای تیپ b لیوفیلیزه و کشت آن...............................................................................................................66 3-2-3-فرآوردن و تخلیص PRP.....................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................66 3-2-4- تهیه بذر محیط کشت ..................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................66 3-2-5-تیمار عصاره مخمر.....................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................67 3-2-6-آماده کردن فرمانتور و تلقیح بذر ......................................................................................................................................................................................................................................................................................................70 3-2-7-نمونه گیری از فرمانتور..................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................72 3-2-8- مرحله رسوب دهی الکلی...................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................73 3-2-9- مرحله الکل زنی .........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................73 3-2-10- مرحله شست و شو با کلریدمنیزیم......................................................................................................................................................................................................................................................................................74 3-2-11- تیمار با ستاولن...........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................74 3-2-12- افزودن فسفات سدیم................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................75 3-2-13- مرحله الکل زنی مجدد.........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................75 3-2-14- تیمار با هیدروکسیل آپاتیت......................................................................................................................................................................................................................................................................................................................75 3-2-15- فیلتراسیون سوپرناتانت ......................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................76 3-2-16- لیوفلیزاسیون ...................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................76 3-2-17- تعیین خلوص PRP تخلیص شده ...............................................................................................................................................................................................................................................................................76 3-2-18- تست ریبوز ....................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................76 3-2-18- 1- اساس تست بیال ........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................77 3-2-18- 2- معرف‌های تست بیال .........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................77 3-2-18- 3-محلولها و ترکیبات .......................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................77 3-2-18- 4-تهیه‌ی محلول‌های استاندارد ریبوز ....................................................................................................................................................................................................................................................................77 3-2-18- 5- آماده سازی PRP تخلیص شده .........................................................................................................................................................................................................................................................................79 3-3-1- آزمون های پروتئین سنجی ..........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................79 3-3-2روش برادفورد ..........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................81 3-3-3- روش پروتئین سنجی Lowry .....................................................................................................................................................................................................................................................................................................81 3-4-1- آزمون ایمونو ژل دیفیوژن ............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................83 3-5- سنجش نوکلئیک اسید ............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................83 3-6-تخلیص اگزوتوسین A سودوموناس آئروژینوزا PA103 ................................................................................................................................................................................................84 3-6-1- طرز باز کردن سوش لیوفیلیزه جدید .................................................................................................................................................................................................................................................................................84 3-6-2-تهیه لوله بذر ............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................84 3-6-3- اطمینان از خالص بودن سوش ............................................................................................................................................................................................................................................................................................................85 3-6-4- تست سوش برای تولید اگزوتوکسین A ................................................................................................................................................................................................................................................................85 3-6-5-تهیه محیط کشت ........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................85 3-6-7- رسوب با استات روی 1 مولار ...........................................................................................................................................................................................................................................................................................................87 3-6-8- رسوب با سولفات آمونیوم .............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................87 3-6-9- دیالیز اگزوتوکسین A .........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................88 3-6-10- کروماتوگرافی فیلتراسیون ژل اگزوتوکسین A ........................................................................................................................................................................................................................89 3-16-2-1مواد مورد نیاز: ......................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................89 3-6-11سنجش تولید اگزوتوکسین A .............................................................................................................................................................................................................................................................................................................89 3-6-11-1-سنجش توکسیسیتی .......................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................90 3-6-12- دتوکسیفای کردن اگزوتوکسین A به روش فرمآلدیئد .........................................................................................................................................................................................91 3-7- ژل فیلتراسیون جهت تخلیص کونژوگه PRP هموفیلوس آنفولانزای تیپb (Hib) با اگزو توکسین A سودوموناس آئروژینوزا ....................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................92 3-8- آزمون های کنترل و کیفی کونژوگه ................................................................................................................................................................................................................................................................................................92 3-9- سنجش پروتئین ....................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................92 3-11- تعیین میزان اسید نوکلئیک ................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................93 3-12- کنترل توکسیسیته غیرعادی((Abnormal toxicity ............................................................................................................................................................................................................94 3-13- آزمون پیروژنی ..................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................94 3-14- ایمیونیزاسیون خرگوشها و خونگیری .................................................................................................................................................................................................................................................................................94 3-15تهیه بافر باربیتال : ...................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................94 3-16- تهیه محلول کوماسی بلو و رنگ بر : ........................................................................................................................................................................................................................................................................................94 3-16- پلی آکریل آمید ژل الکتروفورز درحضور سدیم دو دسیل سولفات(SDS-PAGE) .................................................................96 3-16-1- اصول روش SDS-PAGE .......................................................................................................................................................................................................................................................................................................96 3-16-3- محلولهای مورد نیاز ..............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................97 3-16-4- تهیه ژل پایین SDS-PAGE ....................................................................................................................................................................................................................................................................................................97 3-16-5- تهیه ژل بالا با SDS-PAGE ...................................................................................................................................................................................................................................................................................................98 3-16-6-رنگ آمیزی ژل پلی آکریل آمید ................................................................................................................................................................................................................................................................................................99 3-16-7- محلولهای مورد نیاز ....................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................100 3-16-8- روش رنگ آمیزی ................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................101 3-17- آزمون بررسی فعالیت باکتریسیدالی سرم حیوان ایمیون (SBA) ....................................................................................................................................................101 3-17-1- اصول آزمون SBA ........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................101 3-17-2- مواد مورد نیاز برای آزمون SBA Serum Bactericidal Assay)) ................................101 3-17-3-روش انجام آزمون ...................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................102 فصل چهارم: نتایج 4-1-کشت سویه باکتری.........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................107 4-2- شرایط کشت در فرمانتور............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................108 4-3- تعیین خلوص PRP ........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................109 4-4- اندازه‌گیری میزان ریبوز .................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................111 4-5- کنترل میزان پروتئین در پلی ساکارید PRP و ETA و PRP- ETA.............................................................................................................................113 4-6- کنترل میزان اسید نوکلئیک در پلی ساکارید PRP و PRP- ETA.........................................................................................................................................113 4-7- کونژوگاسیون PRP با اگزوتوکسینA سودوموناس آئروژینوزا........................................................................................................................................................................114 4-8- بازده کونژوگاسیون PRP-ETA ................................................................................................................................................................................................................................................................................................115 4-9- کنترل پیروژنی ......................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................115 4-10- کنترل توکسیسیتی غیر عادی در موش سوری...........................................................................................................................................................................................................................................116 4-11- آزمون ایمونوژل دیفیوژن.......................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................116 4-12- الکتروفورز (SDS-PAGE) برای بررسی وزن مولکولی ..................................................................................................................................................................................117 4-13- ارزیابی فعالیت باکتری کشی سرم حیوان واکسینه شده .................................................................................................................................................................................................117 فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری 5-1- واکسن‌های کونژوگه‌ی (Hboc) PRP-CRM197...................................................................................................................................................................................................................124 5-2- واکسن کونژوگه‌ی PRP-TT .................................................................................................................................................................................................................................................................................................................125 5-3- واکسن کونژوگه‌ی PRP-OMP ...............................................................................................................................................................................................................................................................................................125 5-4- تولید کپسول هموفیلوس آنفولانزای تیپ b(PRP) ....................................................................................................................................................................................................................126 5-5- کونژوگاسیون PRP با اگزوتوکسین A............................................................................................................................................................................................................................................................................127 5-6- سرم باکتریسیدال اسی..........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................128 نتیجه گیری.......................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................... .........................................................................129 پیشنهادات.......................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................... ............ ..................................................................129 منابع............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................... 130 . فهرست شکل ها عنوان صفحه شکل 1-1 کلونی هموفیلوس آنفلوانزا در محیط شکلات آگار..............................................................................................................................................................................................................19 شکل1-2 هموفیلوس آنفلوانزا..........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................20 شکل1-3 تیپ های مختلف کپسول هموفیلوس آنفلوآنزا....................................................................................................................................................................................................................................35 شکل 1-4 پراکندگی سنی عفونت Hib از اکتبر 1990 تا سپتامبر 1991 در شش منطقه در انگلستان و والس. از 433 مورد گزارش شده (84%) 362 مورد به علت hib ، (13%) 54 مورد به علت غیر سروتیپی و 13 مورد سروتیپ نشده بودند.................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................41 شکال3-1- باز کردن سویه PTCC هموفیلوس آنفلوانزا................................................................................................................................................................................................................................67 شکال3-2- تیمار عصاره مخمر . چپ: تغییر رنگ آب در روز اول دیالیز عصاره مخمر.راست: روز سوم دیالیز عصاره مخمر بدون تغییر رنگ آب.................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................70 شکال3-3- فرمانتور Novo-Paljas کشور هلند............................................................................................................................................................................................................................................................71 شکال3-4 راست: اضافه کردن عصاره مخمر و فاکتور رشد – چپ : اضافه کردن بذر به محیط کشت..............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................72 شکال3-5رسوب حاصل از الکل زنی..........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................74 شکل3-6 تهیه استانداردهای ریبوز(الف -قبل از حرارت ، ب – بعد از حرارت) ............................................................................................................................78 شکل 3-7 رسوب با سولفات آمونیوم.........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................88 شکل 3-8 دیالیز.....................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................89 شکل 4-1کلونی هموفیلوس آنفلانزا روی محیط شکلات آگار......................................................................................................................................................................................................107 شکل 4-2 تست آکروفلاوین....................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................107 شکل 4-3 طیف سنجی NMR ............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................110 شکل 4-4 منحنی FTIR.......................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................111 شکل 5-5 آزمون ایمونوژل دیفیوژن.........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................116 شکل 4-6- الکتروفورز (SDS-PAGE) برای PRP-ETA و ETA.....................................................................................................................................................117 فهرست جدول ها و نمودارها عنوان صفحه نمودار 3-1نمودار استاندارد لوری.........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................83 جدول 4-1 شاخص های فرمانتاسیون Hib جدول........................................................................................................................................................................................................................................................108 نمودار 4-1 تغییرات جذب نوری برای رشد Hib..........................................................................................................................................................................................................................................................109 نمودار 4-2 تغییرات PH در رشد Hib.......................................................................................................................................................................................................................................................................................................109 نمودار 4-3 تغییرات گلوکز در رشد Hib.............................................................................................................................................................................................................................................................................................110 جدول 4-2 تهیه استاندارد برای غلظت ریبوز..............................................................................................................................................................................................................................................................................112 نمودار 4-4- منحنی استاندارد ریبوز........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................112 جدول 5-3- میزان ریبوز.........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................112 نمودار 5-5- منحنی استاندارد پروتئین...............................................................................................................................................................................................................................................................................................................113 جدول 4-4- میزان پروتئین...................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................113 جدول 5-4- میزان اسید نوکلئیک.............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................114 نمودار 4-6-منحنی OD فرکشن های کونژوگه ......................................................................................................................................................................................................................................................115 جدول 4-5- عیـار آنتی بادی....................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................118 جدول 4-6- تیتر آنتی بادی باکتری کشی واکسن کونژوگه (PRP-ETA) و PRP در روزهای 15،30، 45........................................................................................................................................................................................................................................................................................... .............................................................................................................................................................119 چکیده هموفیلوس آنفلوانزا سروتیپ b مهمترین عامل مننژیت و پنومونی در کودکان زیر 5 سال در سراسر جهان می باشد که پس از کلونیزه شدن در حلق وارد خون شده و باکتریمی می دهد،در ادامه باکتری از طریق خون خود را به مننژ رسانده و مننژیت می دهد که عامل 95% باکتریمی و مننژیت ها هموفیلوس آنفلوانزا تیپ b می باشد که از کپسول پلی ساکاریدی آن موسوم به پلی ریبوزیل ریبیتول فسفات (PRP) جهت تولید واکسن های کونژوگه گلیکوپروتئینی علیه هموفیلوس آنفلوانزا تیپ b استفاده شده است.به دلیل اینکه پاسخ ایمنی نسبت به این پلی ساکارید غیر وابسته به سلول T بوده و در پاسخ ایمنی سلول خاطره ایجاد نمی گردد،لذا دوز یادآور تاثیری در بالا بردن سطح ایمنی ندارد.برای از بین بردن خاصیت T-INDEPENDT،PRP به طور کوالانسی به اگزوتوکسین A سودوموناس آئروژینوزا (ETA) متصل می گردد.در این پروژه سویه استانانداردهموفیلوس آنفلونزا سروتیپ b ابتدا در فرمانتور حاوی محیط CY (کازآمینواسید – عصاره مخمر )کشت گردید و تخلیص PRP از مایع کشت با انجام روش های الکل پرسپیتاسیون (رسوب دادن الکلی) و رسوب دادن با ستاولن (هگزادسیل تری متیل آمونیوم بروماید)،التراساتریفیوژ و تخلیص با هیدروکسی آپاتیت حاصل گردید.جهت تهیه اگزوتوکسین A نیز سویه PA103 سودوموناس آئروژینوزا در محیط کشت تریپتیکازسوی براث کشت گردید و پس از سنجش توکسیسیته در موش با استفاده از روش قلیایی ،سم زدایی شده و جهت کونژوگه نمودن با PRP از ADHو سیانوژن بروماید به عنوان اسپیسر و EDAC به عنوان عامل لینکر استفاده گردید و کونژوگه حاصل با عبور از ستون CL-4B تخلیص شد. کونژوگه بدست آمده جهت ارزیابی ایمونولوژیکی طی 2 مرحله با فاصله 14 روز به تعدای خرگوش سفید نیوزیلندی تزریق گردید و از هر کدام از خرگوش ها در روزهای 0،15،30،45 خونگیری از قلب انجام شد.تیتر آنتی بادی توسط سرم باکتریسیدال اسی اندازه گیری شد.تیتر باکتری کشی برای PRP خالص در تزریق اول 16 و در تزریق دوم شاهد افزایش تیتر نبودیم.تیتر باکتری کشی برای کونژوگه در تزریق اول 32 و در تزریق دوم 64 بود که شاهد افزایش تیتر بودیم.با توجه به نتایج حاصل شده ،کونژوگه PRP-ETA سبب تحریک بیشتر سیستم ایمنی و افزایش تیتر آنتی بادی در تزریق دوم می گردد.همچنین اگزوتوکسین A دتوکسیفای شده یک کریر مناسب می باشد. کلید واژه: هموفیلوس آنفلونزا تیپ b، سودوموناس آئروژینوزا،واکسن کونژوگه، پلی ریبوزیل ریبیتول فسفات (PRP)، اگزوتوکسین A مقدمه 1-1-1 هموفیلوس آنفولانزا هموفیلوس آنفولانزا یک باکتری گرم منفی است که اولین بار توسط Pfeiffer در سال 1982 توصیف شد.( پیفر،1982 ) این که هموفیلوس آنفلوآنزا انگل مخصوص انسان میباشد باعث شد که این تصور بوجود بیاید که این باکتری عامل اصلی آنفلوانزا میباشد. در هر حال از کالبدشناسی افرادی که مبتلا به حمله ناگهانی (به صورت تکگیر) در طی پاندمی آنفلوآنزا در سال 1918 شدهبودند، هموفیلوس آنفلوآنزا دیده نشد.Pittman کشف کرد که سویههایی از این باکتری میتوانند در دو گروه کپسول دار (قابل تیپبندی) و بدون کپسول (غیر قابل تیپبندی) تقسیم بشوند( پیتمن،1931 ). Pittman بیشتر توانست نشان بدهد که شش تیپ هموفیلوس آنفلوآنزا بوسیله سرولوژی اختصاصی کپسولشان از a-f قابل تیپبندی هستند. به طور عمده سویه تیپ (Hib) b باعث حملات اصلی بیماری از جمله: مننژیت و سپتیسمیا و به دنبال آن اپیگلوتیت، سلولیت، آرتریتسپتیک، پنومونی میشوند(آلکساندر، 1965). سویه بدون کپسول (غیر قابل تیپبندی) منجر به: اوتیت مدیا، سینوسیت و عفونت حاد دستگاه تنفسی تحتانی میشود.بیشترین احتمال آلودگی به بیماری مرتبط با هموفیلوس آنفلوآنزا، کودکان بین سنین 10 تا 16 ماه هستند و اخیراً به عامل اصلی میلیونها مرگ در کشورهای در حال توسعه تبدیل شدهاست. در طی این زمان، کودکان به طور کامل بوسیله سیستم محافظتی آنتیبادی محافظت نمیشوند و همچنین در سرمشان آنتیبادیهای توسعه یافته وجود ندارد (فاترگیل و همکاران،1933) جلب توجه بیماریزایی عفونت هموفیلوس آنفلوآنزا با ورود شیمی درمانی توسط مواد آنتیمیکروبیال کاهش پیدا کرد. با این وجود مرگ و میر ناشی از مننژیت که بوسیله هموفیلوس آنفلوآنزا در آمریکای شمالی در سال 1930 ایجاد شد تقریباً در 100% از موارد مبتلا بود(تیلر وهمکاران،1990). با ظهور آنتیبیوتیکها مرگ و میر در اواسط سال 1960 به 10-5% کاهش پیدا کرد(هاگرتی وهمکاران،1964- ترک وهمکاران،1967) به هر حال، در کمتر از 30% از افراد زندهمانده نقص جدی همانند: اختلال در بینایی، شنوایی، حمله ناگهانی بیماری و زوال عقل دیده می شد.(اسپرولس وهمکاران،1969 ،کروک و همکاران،1949)در طی سال 1970، مقاومت آنتیبیوتیکی سویههای Hib منجر به تکثیر و گسترش آنها شد. در سال 1991 تخمین زده شد که 11% از سویههای خالص شده هموفیلوس آنفلولآنزا تیپ b نسبت به آمپی سیلین و همچنین بیشتر آنتی بیوتیکهای معمول که برای درمان آلودگی به این ارگانیسم استفاده میشد، مقاومت دارند.(بوی وهمکاران،1991). Jenner و همگارانش مقاومت فوقالعاده و غیرمنتظره سویههای هموفیلوس آنفلوآنزا را به کلرومنفنیکل در سال 1990 گزارش کردند. (جنر و همکاران،1990) بیماریزایی هموفیلوس آنفلوآنزا فقط تنها موضوع اصلی در مورد این باکتری نبود، بلکه موضوع ژنتیک بنیادی و تحقیقات مولکولی نیز مطرح بود. در اوایل 1950، هموفیلوس آنفلوآنزا به عنوان دومین نمونه بعد از پنوموکوکوس به عنوان یک ارگانیسم قابل ترنسفورم شدن شناسایی شد. سپس در اواخر 1960، Hamilton smith روی نوترکیبی همولوکوس در هموفیلوس آنفلوآنزا تحقیق کرد، که این تحقیقات به طور مستقیم منجر به کشف تیپ II آنزیمهای اندونوکلئازی محدود کننده شد، که این آنزیم در تکنولوژی DNA نوترکیب بسیار مورد استفاده قرار گرفت. تحقیقات مولکولی و ایمونولوژیکی برروی کپسول پلیساکاریدی فوکوس پیدا کرد که بعدها منجر به توسعه و تجارت و انتشار اولین واکسنهای پلیساکاریدی- کونژوگه در سال 1989 شد. در سال 1995 هموفیلوس آنفلوآنزا اولین باکتری آزادزی بود که ژنومش به طور کامل سکانسبندی شد(فلیچمن،1995). این کار بزرگ بسیار قابل توجه بود و باعث شد که سکانسبندی ژنوم بسیاری دیگر از باکتریها آغاز شود و استفاده از ژنوم و بیوانفوزماتیک در تحقیقات میکروبیولوژی شروع شود . شکل 1-1 کلونی هموفیلوس آنفلوانزا در محیط شکلات آگار 1-1-2 میکروبیولوژی هموفیلوس متعلق است به خانواده پاستورولاسه که دو جنس دیگر به نام های پاستورولا و اکتینوباسیلوس نیز دارد.این باکتری متعلق به این خانواده کوکوباسیل‌های غیراسپور کوچک هستند که نیازهای رشدی مخصوصی دارند و اغلب برای خالص‌سازی به محیط کشت غنی شده نیاز دارند. اسم جنس، هموفیلوس (به معنای دوستدار خون) وابستگی ویژه‌ی این ارگانیسم به مولکول‌های مربوط به خون برای رشد تحت شرایط هوازی مربوط است. مورفولوژی هموفیلوس آنفولانزا در نمونه‌های بالینی از کوکوباسیل ها تا رشته‌های دراز متغیر است. (دیویس و همکاران،1973) شکل (2-1) هموفیلوس آنفلوانزا 1-1-3 دسته‌بندی سویه های هموفیلوس آنفلوآنزا قابل تیپ بندی : یافته های حاصل از اپیدمیولوژی بیماری های هموفیلوس آنفلوآنزای تیپ بندی شده منجر به جستجوی مقدماتی برای سیستم نشانگر تبعیضی بین سویه ها شد. در اوایل 1980، ایزوله های کلینیکی Hib براساس تفاوت در الگوی تحرک الکتروفورنیک پروتئین های خارج غشائی بزرگ(omps) و لیپوپلی ساکارید(lps) کلاس بندی شدند(بارن کمپ و همکاران،1981، اینزا و همکاران،1984). سویه های Hib به یکی از چهار گروه براساس واکنششان با آنتی بادی مونوکلونال اختصاص lps تقسیم شدند. Musser و همکاران تلاش کردند تا تنوع ژنتیکی و روابط تکاملی بین نژادهای هموفیولوس را بسنجند. (موسر وهمکاران،1990 و موسرو همکاران 1985). سویه ها بوسیله الکتروفوز آنزیم های چندکانونی (MLEE) که در آن چند شکلی آنزیم‌های متابولیک ضروری برای برآورد واگرایی از یک نیای مشترک فرضی مورد استفاده قرار می‌گیرد، دسته بندی شدند. در طول زمان، ژن‌های کد کننده آنزیم‌های متابولیک ضروری، متحمل جهش‌های طبیعی می‌شوند.. 177 سویهی تیپ b، از خون یا مایع مغزی- نخاعی کودکان آمریکای شمالی خالص شد و در داخل چندین گروه با تفاوتهای ژنتیکی یا تیپ های الکتروفورزیس قرار گرفت. هر کدام تعدادی آلل های همراه غیر تصادفی را نشان می دادند.( موسرو همکاران 1985) سویه هایی که تطابق یا شباهت زیاد از نظر ETS داشتند از نواحی مختلف جغرافیای بدست آمدند و این نتیجه نشان داد که یک خویشاوند کلونال بین سویه های تیپ b وجود دارد و نتیجه مهمتر اینکه سویه هایی که باعث بیماری های تهاجمی می شدند از نظر تنوع ژنتیکی دارای محدودیت بودند. بعلاوه اینکه بیشتر ایزولهای آمریکای شمالی به دو سویه نزدیک از نظر ETS متعلق بودند و متفاوت بودند با سویه هایی که از کشورهای مختلف اروپایی جمع آوری شده بودند(اروین و همکاران 1995). این یافته های یک آلودگی اپیدمیولوژیک را پیشنهاد کرد در حالی که کلونهای تیپ b موفق شدند از میان یک جمعیت به میان جمعیت میزبان دیگر متمایل شوند و باعث یک هایپراندمیک در بیش از یک دوره در سال بشوند و این تغییرات تقریباً شبیه به تغییراتی بود که در نیسر یا مننژیتیس اتفاق افتاد(جونز و همکاران،1998 و کوگانت،1998). اخیراً کاربرد تکنیک‌هایی مانند مولتی لوکوس سکونس تایپینگ (MLST)، ریبوتایپینگ و توالی‌یابی RNA، تفاوت‌های اساسی را بین نژادهای قابل تیپ بندی و غیر قابل تیپ بندی هموفیلوس آنفولانزا آشکار کرده است. 1-1-4 کلون سازی و تهاجم : بیماری‌زایی هموفیلوس به وسیله‌ی مطالعات موردی و با استفاده از جانوران و مدل‌های عفونی invitro بررسی شده است. بررسی هموفیلوس آنفولانزا مثال خوبی برای فهم بیماری‌زایی باکتریایی به صورت کلّی بوده است. چندین مرحله مجزا برای تهاجم هموفیلوس تشخیص داده شده است. 1-2-4 کلون‌سازی در مجرای تنفسی فوقانی هموفیلوس آنفلوآنزا به طور معمول در سطح مولکولی دستگاه تنفسی انسان و گهگاه در دستگاه ژنیتال زنان مستقر می شود(گیلسدروف و همکاران،1997). در بچه ها احتمال مستقر شدن باکتری نسبت به افراد بالغ بیشتر است. تقریباً 5% از اشخاص سالم سروتایپهای a-f را دارا می باشند (ترک،1994). از نازوفارنکس، ارگانیسم از یک شخص به شخص دیگری بوسیله ی قطرات هوا یا انتقال مستقیم (بوسیله ی ترشحات) انتقال پیدا می کند.(فارلی و همکاران،1992) واکنش اولیه بین هموفیلوس و انسان در کشت بافت انسان که حد واسطی بود برای اتصال باکتری به ماده بزاقی نشان داده شد(ردی و همکاران،1996 و دیویس و همکاران،1995). در سیستم های کشت در invitro مانند سلولهای اپی تلیال (oropharyhgeal) نشان داده شد که پیلی یک حد واسط برای اتصال می باشد، پس بنابراین برای جلوگیری از اتصال باکتری به سلول انسان پیلی مورد هدف محققان قرار گرفت (پیچیچیرو و هکگاران،1982- گورینا و همکاران 1982) بعدها گزارش شد که هموفیلوس هایی که فاقد پیلی هستند نیز به میزان قابل ملاحظه ای توسط پروتئین های غشای خارجی (omps) به سلولهای پستانداران متصل می شوند.(جیم و همکاران،1990 و فارلی و همکاران،1990). آنها بوسیله میکروسکوپ الکترونی (TEN) نشان دادند که هم Hib هایی که دارای پیلی بودند و هم Hib هایی که فاقد پیلی بودند هر دو به طور انتخابی به سلولهای اپی تلیال غیر مژه دار متصل می شوند(فارلی و همکاران،1990). اخیراً گزارش شده که گانگلوزوئیدهای اختصاصی (سالیتد گلیکواسفنگولیپید) از سلولهای اپی تلیال تنفسی انسان و ماکروفاژهایی که رسپتور برای هموفیلوس آنفلوآنزا دارند سلولهای مناسبی برای اتصال باکتری می باشند.(فکیح و همکاران،1997) محققان متوجه شدند که هموفیلوس آنفلوآنزا برای مدت زیادی می تواند در داخل سلول زنده بماند. این یافته یک نتیجه گیری مهم را در برداشت، و آن اینکه، معلوم شد که زنده ماندن باکتری در داخل سلول، ریشه کنی آنرا به وسیله آنتی میکروبیالها دچار مشکل می کند(سادنبرگ و همکاران،1984) مگر اینکه از عواملی که در داخل سلولهای انسانی فعال هستند مانند ریفامپیسن و quinolones استفاده شود. در مطالعات invitro توانایی زنده ماندن هموفیلوس آنفلوآنزا در داخل سلولهای اپی تلیال و ماکروفاژها به اثبات رسید.(ویلیامز و همکاران،1991،نوئل و همکاران،1994) 1-3-4 حمله به اپیتلیوم درسیستم کشت درinvitro، مشخص شد که سویه های هموفیلوس آنفلوآنزا یک گرایش شدید به موکوس دارند که این گرایش منجر به در هم ریختن اتصالات محکم سلولهای اپی تلیال می شود که نتیجه این بی نظمی ریزش سلولهای مژه دار و ciliostasis است(جکسون و همکاران،1996، جانسون و همکاران،1986، فارلی و همکاران،1992). از این گذشته، آسیب به سلولهای اپی تلیال منجر به در معرض گذاشتن سلولهای بازال لایه های سطحی زیرین و غشاهای زیرین می شود. این روند امکان گسترش عفونت به بافت های دیگر را فراهم می کند.( فارلی و همکاران،1992) نکته جالب توجه اینکه که این باکتری تمایل زیادی به این سلولها نسبت به سلولهای اپی تلیال سالم دارد.(هوود و همکاران1990،جیم و همکاران،1990). 1-4-4 حمله به جریان خون تا اواخر دهه 1970 مشخص نبود که انتقال هموفیلوس آنفولانزا به سیستم عصبی مرکزی (CNS) از طریق گسترش از نازوفارنکس به همراه رشته های عصبی حس بویایی اتفاق می افتد یا طریق مسیر خونی. برای بررسی این مسئله، نژادهابی مشابه هموفیلوس که مقاومت آنتی‌بیوتیکی متفاوت داشتند به داخل بینی موش ها تلقیح شدند یک نژاد در خون و مایع مغزی نخائی (CSF) تشخیص داده شد(ماکسون و همکاران 1978) که نشان دهنده‌ی مسیر خونی برای این ارگانیسم بود. به علاوه، ظهور مننژیت بعد از تلقیح درون بینی، در موش‌های صحرایی نشان‌دهنده ارتبط مستقیم با شدت باکتری بود(ماکسون و همکاران 1977). بررسی‌های دقیق میانکنش مستقیم بین هموفیلوس آنفولانزا و سلول‌های اندوتلیال با استفاده از مدل سلول‌های اندوتلیال سیاهرگری نافی انسانی، انجام شد. با استفاده از TEM، بلع فاگوسیتوزی این ارگانیسم به وسیله این سلول‌ها آشکار سازی شد(ویرجی و همکاران،1991). این مطالعه نشان داد که این ارگانیسم، بعد از ورود، درون واکوئول‌های سلول‌های اندوتلیال زنده می‌ماند و سپس به درون تمامی واکوئول‌های درون سلول منتقل می‌شود و در سطح دیگر سلول ظاهر می‌شود. همانطور که برای اولین بار Rubin و Moxom گزارش دادند، اکنون پذیرفته شده است که هموفیلوس آنفولانزا از طریق حمله مستقیم به مویرگ‌های تغذیه‌کننده‌ی بافت اپیتلیال، از بافت زیر اپیتلیالی به جریان خون گذر می‌کند.(روبین و همکاران،1983) 1-5-4 بقا در جریان خون پاسخ ایمنی ذاتی و اکتسابی در جریان خون میزبان بر علیه باکتری به وجود می آید و این در حالی است که باکتری برای به وجود آوردن آلودگی و بیماری بایستی تداوم داشته و زنده بماند. نشان داده شد که بیش از 90% از جمعیت باکتری های تلقیح شده به داخل روده (ir) موش در چند دقیقه از بین رفته اند(ماکسون و همکاران،1981). جالب اینکه سویه هایی که از سیستم ایمنی ذاتی و اکتسابی فرار کرده اند و تداوم داشتند، به میزان زیادی، به مننژ موش حمله کرده و بیماری مننژیت را ایجاد کرده اند(نوئل و همکاران،1990). فاکتورهایی که به حیات زیر جمعیت ها یا گونه های مختلف از هموفیلوس آنفلوآنزا در جریان خون کمک می کند بعداً به طور کامل مورد بحث قرار می گیرند. پاکسازی هموفیلوس آنفلوآنزای کپسول دار از خون مستلزم نشستن فاکتور c3 روی باکتری می باشد، که این عمل مستقل از ترکیبات مکمل بعدی نظیر c5- c9 می باشد. در صورتی که فاکتور c3 برروی باکتری بنشیند، باکتری به دنبال فاگوسیتوز ماکروفاژها از جریان خون خارج می شود. دریافت فایل تهیه کونژوگه پلی ساکارید PRP هموفیلوس آنفلوآنزا تیپ b با اگزوتوکسین A سودوموناس آئروژینوزا و سنجش ایمنی زایی آن در مدل حیوانی

پایان نامه بررسی رفاه ذهنی و عوامل موثر بر آن در میان جوانان ساکن شهر تهران

پایان نامه بررسی رفاه ذهنی و عوامل موثر بر آن در میان جوانان ساکن شهر تهران این فایل حاوی مطالعه پایان نامه کارشناسی ارشد رشته علوم اجتماعی با عنوان بررسی رفاه ذهنی و عوامل موثر بر آن در میان جوانان ساکن شهر تهران می باشد که با فرمت pdf در 290 صفحه در اختیار شما عزیزان قرار گرفته است،در صورت تمایل می توانید این محصول را از فروشگاه خریداری و دانلود نمائید. دریافت فایل پایان نامه بررسی رفاه ذهنی و عوامل موثر بر آن در میان جوانان ساکن شهر تهران

شناسایی و مقایسه تنوع گونه ای ماکرو بنتوزهای چشمه های باداب سورت،زرابه،قل قل و کورچشمه در استان های سمنان و مازندران

شناسایی و مقایسه تنوع گونه ای ماکرو بنتوزهای چشمه های باداب سورت،زرابه،قل قل و کورچشمه در استان های سمنان و مازندران فهرست مطالب چکیده..............................................................................................................................................................1 فصل اول (کلیات تحقیق و مقدمه)...................................................................................................................2 1-1-بیان مسئله...............................................................................................................................................5 فصل دوم (مروری بر ادبیات تحقیق و پیشینه آن)...........................................................................................7 2-1-کلیات (تاریخچه سابقه مطالعه و تحقیق کفزیان در ایران و جهان ..........................................................8 2-2-معرفی استان سمنان.................................................................................................................................9 2-3-چشمه های استان سمنان ......................................................................................................................11 2-4-معرفی مهم ترین راسته ها و خانواده های ماکروبنتوزهای آبهای شیرین ایران........................................12 2-5-راسته بهاره ها (پلکوپترا)......................................................................................................................12 2-6-راسته یکروزه ها(افموپترا).....................................................................................................................16 2-7-راسته دوبالان (دیپترا)............................................................................................................................23 2-8-بال موداران(تریکوپترا)..........................................................................................................................32 2-9-راسته ناجورپایان(آمفی پودا).................................................................................................................37 2-10-رده تورکیان........................................................................................................................................38 فصل سوم (مواد و روش کار).........................................................................................................................40 3-1-نمونه برداری.........................................................................................................................................41 3-2-وسایل نمونه برداری کفزیان.................................................................................................................41 3-3-نگهداری نمونه ها ................................................................................................................................43 3-4-شناسایی ماکروبنتوزها...........................................................................................................................43 3-5-دانه بندی رسوبات و تعیین موادآلی.......................................................................................................43 3-6-تعیین موقعیت ایستگاههای مطالعاتی.....................................................................................................44 3-7-منطقه مورد بررسی................................................................................................................................47 3-8-عملیات آزمایشگاهی.............................................................................................................................52 3-9-سنجه یا معیار جمعیتی.........................................................................................................................52 3-10-شاخص ها..........................................................................................................................................53 فصل چهارم (نتایج)........................................................................................................................................56 4-1-رده بندی نمونه های موجود..................................................................................................................57 فصل پنجم (بحث).......................................................................................................................................99 5-1-بحث و نتیجه گیری.............................................................................................................................100 5-2-پیشنهادها............................................................................................................................................107 منابع............................................................................................................................................................109 منابع فارسی ................................................................................................................................................109 منابع لاتین....................................................................................................................................................113 چکیده انگلیسی ..........................................................................................................................................121 چکیده تنوع و فراوانی بی مهرگان آبزی بر حسب شرایط محیطی متفاوت می باشند، بنابراین با توجه به حساسیت آنها نسبت به آلاینده های مختلف می توان شرایط آب از نظر آلودگی را ارزیابی نمود. در این مطالعه ترکیب و تنوع ماکروینتوزهای استان سمنان در سال 1391-92 در چهار ایستگاه(چشمه های باداب سورت،چشمه قل قل وزرابه)،مورد بررسی و شناسایی قرار گرفت. در این بررسی به منظور شناسایی ماکروبنتوزهای چشمه های باداب سورت قل قل زرابه و کورچشمه استان سمنان بدین منظور از بهمن ماه سال 1391لغایت مرداد ماه 1392 چهار ایستگاه(چشمه های باداب سورت قل قل زرابه و کورچشمه) انتخاب و بصورت فصلی و با استفاده از قاب توری ((Surber sampler 50×50 سانتی متر به مدت هفت ماه مورد نمونه برداری قرار گرفت و نمونه های جمع آوری شده را با فرمالین 4% تثبیت و جهت بررسی به آزمایشگاه منتقل گردیدند. برخی شاخص های تعیین کیفیت آب که بر فیزیولوژی موجودات بنتوزی و نیز کیفیت آب اثر گذار هستند از قبیل(اکسیژن محلول، دما،pH، TDS کل جامدات محلول، EC هدایت الکتریکی ، O2، دبی آب) مورد سنجش قرار گرفتند. شاخص مارگالف، سیمپسون و شانون نیز برای تمامی ایستگاه ها در طول دوره نمونه برداری محاسبه گردید. براساس نتایج به دست آمده از این بررسی 25 خانواده از 13 راسته ،شامل:, Simuliidae, Tipulidae, Veliidae, Batidae, Stratiomyiidae, Tubificidae ,Anthomyiidae, Gomphidae Lestidae ,Glossiphonidae, Erpobdellidae, Corduliidae Dreissensiidae, Physidae, , Ancylidae, Tabanidae, Chironomidae, Argyronetidae, Gammaridae, Potamidae, Asellidae,Hydropsychidae Ceratopogonidae, Platycnemididae, ,Coenagrionidae, , در مجموع چهار ایستگاه شناسایی شد واژگان کلیدی: آلودگی، سوربر، پارامترهای فیزیکوشیمیایی، ماکرو بنتوز، شاخص مارگالف, شاخص شانون،شاخص سیمپسون فصل اول کلیات تحقیق مقدمه آب های شیرین زیستگاه طبیعی گونه های فراوانی ازآبزیان است که هر یک تا حدودی دارای فون وفلور مخصوص به خود می باشد. بنا به عقیده روزنبرگ(Rosenberg,1999) مهمترین ذخایر آبزی آب های شیرین، بی مهره گان کفزی ساکن آنها می باشند که در شبکه ی غذایی و تولیدات رودخانه نقش اساسی دارند. همچنین برای تعیین کیفیت محیطی رودخانه ها و پایش بیولوژیکی آنها به کار می روند. در این راستا، موجودات شاخص و عکس العمل های آنها را نسبت به شرایط محیطی در نظر می گیرند. بطورکل محققین، اندازه گیری پارامترهای فیزیکی و شیمیایی آب را به مانند برداشت عکس و بررسی بیولوژیکی (بخصوص ماکرو بنتوزها) را مشابه تهیه فیلم ویدیویی از یک اکوسیستم می دانند(Rosenberg,1999). در واقع تنها راه عملی و به صرفه اقتصادی برای تعیین سلامت اکولوژیکی آب ها و تعیین اینکه آیا فعالیتهای انسانی موجب کاهش کیفیت آنها می شود، ارزیابی و پایش بیولوژیکی است(Lenat,1993). ایده اصلی فرابینی زیستی بسیار ساده است زیرا انواع جانداران آب های شیرین در شرایط معین کیفیت آب قادر به حیاتند. زمانی که شرایط تغییر می کند؛ مثلاً وقتی که یک چشمه مقادیر قابل توجهی از آلودگی دریافت می نماید، فراوانی، توزیع و ترکیب جمعیت موجودات آبزی در منطقه مورد اثر تغییر میکند و بی مهره گان کفزی از رایج ترین ارگانیزم های بکار رفته در این مقوله اند. تعداد شاخص۵ برابر تمام شاخص هایی است که در ارتباط با سایر گروهها (جلبک ها وماهیان) وجود دارد. همچنین رینولدسون بیان می دارد که بی مهره گان کفزی، مؤثرترین گروه بوده و امروزه از اساسی ترین اجزای بیولوژی آب های شیرین هستند که به کمک آنها و با استفاده از ترکیب جمعیتشان و تکیه بر گروه های شاخص، شرایط کیفی آب ها مشخص می شود(Reynoldson,1992). در واقع ماکروبتنوزها، موجوداتی هستند از جوامع جانوری که در داخل و یا روی بستر زندگی می کنند. بی مهره گان کفزی جانوری یا زئو بنتوزها ساکنان رایج در محیط های آبی بوده و حدأقل بخشی از چرخه زندگی خود را در بستر آبگیرها سپری می کنند. و بر روی الک های با منافذ ۵۰۰ میکرون (نیم میلیمتر) باقی می مانند(Rosenberg,1999). چندین ویژگی موجب شده که این موجودات بیشتر مورد توجه متخصصان پایش بوم سازه های آبی باشند.از جمله این ویژگی ها میتوان به این موارد اشاره نمود: ۱- آنها در همه آبگیرها حضور دارند.۲- تنوع گونه ای بالایی دارند و با تعداد زیاد گونه ها اغلب دارای محدوده وسیعی از حساسیت نسبت به آلاینده ها بوده که پاسخهای وسیعی به تغییر شرایط مهیا می نمایند.۳- ساکن بستر بوده، جابجایی و حرکت مشخص ندارند.۴- چرخه زندگی طولانی داشته به طوری که امکان بررسی وتعیین حدود و وسعت مکانی و زمانی آشفتگی ها را فراهم می آورند.۵- تغییرات کیفی آب را برخلاف اندازه گیری پارامترهای فیزیکی وشیمیایی، بصورت دوره ای نمایش می دهند(Feminella,1999). اینها همه از مزایایی هستند که برای مطالعات ارزیابی زیستی به بی مهره گان کفزی نسبت به سایر گروهها (جلبک ها و ماهیان) اولویت می بخشد. استفاده از بی مهره گان کفزی بر این فرض استوار است که آب هایی که در فشار آلودگی هستند تنوع کمتری داشته و در آنها گونه های مقاوم غالبیت داشته باشند(Wallen,2002). با توجه به بحران کم آبی و خشکسالی های متعدد منابع آب های سطحی در کشور ایران، اهمیت این منابع به ویژه چشمه های باداب سورت ،از اهمیت بسیار زیادی برخورداراست. با این حال در حقیقت در کشور ما تاکنون بررسی هایی که در ارتباط با آب های شیرین به انجام رسیده است معمولا بدون پیوستگی خاص و هدف مدون پیگیری شده است، اینگونه بررسی ها غالبا درحد بررسی های کلی و نیز ثبت شرایط فیزیکی وشیمیایی و تا حدودی فون آنها بوده است. بررسی هایی که در برگیرنده شناخت اکولوژیکی و تنوع زیستی آب های جاری بوده و با هدف ارزیابی کیفی آب های جاری از جنبه اکولوژیکی و بیولوژیکی باشد، اندک بوده ویا موجود نیست. جا دارد تحقیقات وسیع تردرآب های داخلی انجام شود و منابع آبی تحت پایش بیولوژیکی دایم باشد. درحقیقت آنها با اشرافی که به اهمیت منابع آب های جاری خود دارند، تحت برنامه های مدون و منظم به پایش منابع آب های سطحی خود پرداخته و لذا در مطالعات خود بهترین ابزار را که همانا پایش بیولوژیکی و استفاده از ماکرو بنتوزها بعنوان موثرترین نشانگرهای محیطی می باشند، بکاربسته اند. بعنوان مثال فقط در ایالات متحده چندین آژانس و سازمان دولتی و غیر دولتی مانند آژانس حفاظت محیط زیست(EPA)، موسسه حفاظت منابع طبیعی (NRCC)و... با بکارگیری بیولوژیست ها به پایش زیستی منابع آبی می پردازند. در هر صورت از بین مقالات ومطالعات بسیاری که اساساً فون ماکروبنتوز رودخانه ها را مورد توجه قرار داده اند می توان به چندین مورد اشاره نمود : تحقیق در مورد پراکنش گونه ای از سخت پوستان کفزی بنام صدف گورخری Dreissena Polymorpha در سال١٩٩١ توسط Strayer در نهرهای آمریکای شمالی بصورت طولانی مدت انجام شده در این پژوهش ، پارامترهای فیزیکی و شیمیایی آب و تراکم نمونه ها به همراه شرایط فیزیکی ایستگاه مورد بررسی قرار داده ، که پراکنش و غنای گونه مزبور به همراه اثرات فصول و ایستگاه های نمونه برداری در نهرهای مختلف مورد تجزیه و تحلیل نهایی قرار گرفته و در رابطه با شرایط کیفی نهرها اظهار نظر نموده است(Strayer,1991). همچنین درمطالعه ای مشابه، تر کیب گونه ای بی مهره گان کفزی وشرایط محیطی در نهر کوکامبر توسط Bass درسال١٩٩٥، مورد مطالعه واقع شده بدین صورت که نمونه های آب و بی مهره گان کفزی از ایستگاه های بالادست وپایین دست نهر مزبور بطور فصلی جمع آوری شده و با توجه به عوامل محیطی و ساختار جمعیتی بی مهره گان بخصوص شاخص تنوع، نهر مزبور را مورد ارزیابی کیفی قرار داده و در نتیجه این نهر را محیطی مناسب که قابلیت حمایت از گروه های متنوعی از کفزیان دارد تشخیص داده است(Bass,1995) .در راستای تحقیقات مذکور به عنوان اهداف این پروژه سعی شده است که جوامع کفزی رودخانه مورد شناسایی واقع شوند همچنین، فراوانی وپراکنش فصلی ماکروبنتوزهای رودخانه تعیین گردد علاوه بر آن ساختار جمعیت ماکروبنتوزهای ساکن رودخانه در طول مسیر(محل ایستگاه ها) مورد ارزیابی واقع گردد که در نهایت بتوان ارزیابی دقیق، سریع و در عین حال ارزان قیمتی از رودخانه ارایه نماییم. همچنین رودخانه از دیدگاه شاخص زیستی، طبقه بندی اکولوژیکی گردد و تاحدودی منابع عمده آلوده کننده رودخانه شناسایی شود. 1-1-بیان مسئله بنتوزها(درشت بی مهرگان کف زی): گروهی از موجودات زنده هستند که در روی یا کف بدنه آبی زندگی می کنند(از مهم ترین جوامع حیاتی اکوسیستم های آبی هستند). نام بنتوز از زبان یونانی گرفته شده و به معنای « اعماق دریا» است. جوامع بنتیک طیف وسیعی از گیاهان، حیوانات و باکتریها از تمام سطوح تغذیه ای را شامل می شوند. ارگانیزمهایی هستند که در بستر به سر می برند وبه دو دسته دائمی وموقتی تقسیم می شوند. تمام عمر خود را در بستر به سر می برند.تغذیه آنها به صورت فیلتر فیدراز پلانکتون ها بوده وبه روش های مختلفی به سطوح می چسبند.به دو گروه اصلی ، ماکروبنتوزها و میکرونبتوزها تقسیم می شوند .ماکروبنتوزها موجوداتی هستند که در صافی نمره 30 استاندارد آمریکایی باقی می مانند. این روش تنها برای ماکروبنتوزهایی مناسب است که در روی ماسه ، گل ، سنگریزه یا سوبسترای گسترده دریاچه ها یا کف رودخانه ها و نهرها به سر می برند با وجود اینکه موجودات کفزی تقریبا در بستر تمامی اکوسیستم های آبی پراکنده شده اند ، اما گروهی از آنها به دلایل مشخص ، بسترهای خاصی را برای ادامه حیات خود انتخاب می نمایند. در این حالت وضعیت بستر می تواند نشان دهنده نوع موجودات ساکن در آن باشد . به همین دلیل این گونه ها بنام گونه های شاخص ( Indicator species ) نامیده می شوند از جمله اجزای زنده اکوسیستم های آبی همان طور که گفته شد موجودات کفزی می باشند که با ایفای نقش های مختلف سهم مهمی در ایجاد تعادل اکوسیستم مربوطه دارند. این موجودات جزئی از زنجیره غذایی زیستگاه های آبی می باشند که نیاز غذای بسیاری از گونه های آبزی بویژه ماهیان را برآورده می نمایند و بدین ترتیب در چرخه انرژی و مواد غذایی اثر می گذارند. موجودات کفزی باعث معدنی شدن مواد آلی شده و همچنین به عنوان دومین یا سومین سطح غذایی مورد استفاده سایر آبزیان قرار گرفته اند ( نظامی و خارا ، 1383 ). مطالعه اجتماعات کفزی به خصوص تعیین میزان زی توده و تولید ثانویه آن ها به دلیل اهمیت و نقش این موجودات در زنجیره غذایی لایه بنتیک ، می تواند نشانگر میزان حاصلخیزی بستر دریا باشد و با توجه به اینکه مستقیماً مورد تغذیه ماهیان و میگو وسایر آبزیان کفزی قرار می گیرند ، می توان با استفاده از تولید آنها ، پتانسیل ذخایری مانند ماهی و میگو را در منطقه مورد نظر ، برآورد نمود( باقری و عبدالملکی ، 1381) همچنین مطالعه و کسب اطلاعات در رابطه با میزان فراوانی ، بیوماس وتولید ثانویه موجودات کفزی بویژه ماکروبنتوزها در اکوسیستم های آبی می تواند به عنوان شاخصی برای شناخت بیشتر منابع آبی و ارزیابی ظرفیت های شیلاتی و در نتیجه تعیین پتانسیل بهره برداری از ذخایر کفزیان مورد استفاده قرار گیرد (شاخصی از میزان کل تولیدات هستند)، همچنین عواملی مثل مقدار غذا ، نوع بستر ، شرایط فیزیکی و شیمیایی حاکم بر زیستگاه ، مقدار مواد آلی ، آلودگی محیط زیست ، اندازه ذرات رسوب ، میزان اکسیژن محلول ، تغییرات فصول نوع ماهی و تعداد ماهیان کفزی خوار می تواند بر فراوانی و تنوع این موجودات کفزی تاثیر گذار باشد ( نظامی و خارا ، 1383 ) . بطور کلی در فراوانی و تنوع موجودات کفزی عوامل مختلفی دخیل هستند ، بطوریکه می توان به مقدار غذا ، نوع بستر ، شرایط فیزیکی و شیمیایی حاکم بر زیستگاه ، مقدار مواد آلی ، آلودگی محیط زیست، اندازه ذرات ، رسوب ، میزان اکسیژن محلول ، نوع ماهی و تعداد ماهیان کفزی خوار اشاره کرد ( نظامی و خارا ، 1383 ) .انتخاب ابزار نمونه برداری با توجه به جنس بستر متفاوت است.در بستر ریگی - شنی،از سوربر ، و در بستر گلی – لجنی ، از گرب استفاده می شود. ماکرو بنتوزها بسته به نوع ، اندازه و تراکم شان ، از طریق تغذیه و فعالیت های حفاری در مخلوط کردن رسوبات نقش مهمی دارند. از سوی دیگر بافت ذرات و اجزاء رسوب به همراه باکتریهای تجمع یافته در آن در تغذیه برخی ماکروبنتوزها مثل Tubificidae نقش مهمی داشته و بطور غیر مستقیم در تغذیه برخی از ماهیان مهم بوده و اهمیت اندازه ذرات را در تعداد و فعالیت باکتریهای بستر نشان می دهد ( میرزاجانی و همکاران ،1377 ). بی مهرگان آبزی در زنجیره غذایی رودخانه به عنوان مصرف کنندگان اولیه از تولیدات گیاهی نظیر جلبک ها ، دیاتومه ها ، خزه ها و اجزای پوسیده برگها استفاده می کنند و وارد چرخه تولید انواع ماهیان می شوند و زمانیکه به بلوغ می رسند به پرواز در می ایند و یا بطور غیر مستقیم طعمه مصرف کنندگان ثانویه می گردند. فصل دوم مروری بر ادبیات تحقیق و پیشینه تحقیق کلیات 2-1-تاریخچه سابقه مطالعه وتحقیق کفزیان در ایران و جهان مطالعات بیولوژکی مختلفی توسط محققان برروی آب های شیرین ایران و خارج از کشور انجام شده است. از مهم ترین تحقیقات در مورد موجودات بنتیکی ایران مربوط به مطالعه توسط Gascon و همکاران در سال 2007 انجام شد، در این مطالعه تغییرات در ماکروبنتوزهای مرداب نمکی مدیترانه ای پس از یکسال خشکسالی شدید،باتاکید ویژه بر جمعیت Corophium orientale مورد بررسی قرار گرفت .مطالعه دیگر توسط بهروزی راد و احمدی در سال 1387 انجام شد.این بررسی یروی کفزیان بزرگ تالاب های بین المللی کلاهی وتیاب در جنوب ایران ،استان هرمزگان صورت گرفت .همچنین (خانی پور،1370) رودخانه پلرود را از نظر لیمنو لوژیکی مورد بررسی قرار داد.(نوان مقصودی و همکاران ،1382) مطالعاتی تحت عنوان بررسی توان تولید بر اساس تنوع و فراوانی کفزیان در رودخانه شمرد سیاهکل انجام دادند و 9 راسته از حشرات را در این رودخانه شناسایی کردند (احمدی و همکاران،1379) زی توده رودخانهای آغشت و کردان برآورد نمودند. (رحیمی بشر،1380) رودخانه پلرود را از نظر ارزیابی توان تولید طبیعی و بنتوزی مورد مطالعه قرار داد و 4 راسته بنتوز از رده حشرات را در این رودخانه شناسایی نمود. (ابراهیم نژاد ،1382) تنوع و فراروانی بزرگ بی مهرگان کفزی و شاخصهای بیولوزیکی رودخانه زایینده رود را بررسی نمود. در بررسی دیگر( ابراهیم نژاد و نیکو ،1383) شناسایی تاکسنومیک و پراکنش بی مهرگان بزرگ رودخانه ماربر در استان اصفهان را انجام دادند. (قانع و همکاران ،1385) رودخانه چافرود در شمال ایران (استان گیلان) را بر اساس ساختار جمعیت بزرگ بی مهرگان آبزی مورد ارزیابی قرار دادند. (گرجی پور و همکاران ،1387) در بررسی لیمنو لوژیکی رودخانه زهره در استانکهگیلویه و بویر احمد 9 راسته از رده حشرات را شناسایی نمودهاند. (میرزاجانی و همکاران ،1387) ارزیابی کیفی رودخانه های منتهی به تالاب انزلی را بر اساس جوامع کفزیان انجام دادند (جرجانی و همکاران ،1387). شاخص زیستی آلودگی و فون کفزیان نهر مادرسو پارک ملی گلستان را مورد ارزیابی قرار دادند. Arimoro et al, 2007)) رود خانه آسه در دلتای نیجر را از نظر الگوی جوامع بزرگ بی مهرگان کفزی و تنوع آنها در ارتباط با کیفیت آب مورد مطالعه قرار دادند. (Javanshir et al, 2008) تنوع بی مهرگان کفزی و تولید ثانویه مصب رودخانه تجن را مورد بررسی قرار دادند. (et al, 2009 Leunda) رودخانه Erro در کشور اسپانیا را از نظر تغییرات فصلی بزرگ بی مهرگان کفزی و شاخص های زیستی مورد مطالعه قرار دادند. در ضمن شناخت و مطالعه موجودات در بستر رودخانه وضعیت زیستی منطقه را مشخص میکند به عنوان مثال بهاره ها در نزدیک جویبارهای سریع و تمیز با امواج ملایم یافت میشوند آنها به تنهایی نشانهایاز اکسیژن خوب و بالای آب و شاخص زیستی مناسبی برای بستر میباشند (مقصودی و همکاران ، 1382 ) . همچنین مطالعه و کسب اطلاعات در رابطه با میزان فراوانی ، بیوماس و تولید ثانویه موجودات کفزی بویژه ماکروبنتوزها در اکوسیستم های آبی میتواند به عنوان شاخصی برای شناخت بیشتر منابع آبی و ارزیابی ظرفیت های شیلاتی و در نتیجه تعیین پتانسیل بهره برداری از ذخایر کفزیان مورد استفاده قرار گیرد ( نیکویان ، 1376) .همچنین عواملی مثل مقدار غذا، نوع بستر، شرایط فیزیکی و شیمیایی حاکم بر زیستگاه ، مقدار مواد آلی، آلودگی محیط زیست، اندازه ذرات رسوب، میزان اکسیژن محلول، تغییرات فصول، نوع ماهی و تعداد ماهیان کفزی خوار میتواند بر فراوانی و تنوع این موجودات کفزی تاثیر گذار باشد (نظامی و خارا ، 1383) همچنین این موجودات کفزی تقریباً در بستر تمامی اکوسیستم های آبی پراکنده شدهاند، اما گروهی از آن ها بدلایل مشخص، بسترهای خاصی را برای ادامه حیات خود انتخاب می نمایند در این حالت وضعیت بستر میتواند نشان دهنده نوع موجودات ساکن در آن باشد. به همین دلیل این گونه ها به نام گونه های شاخص (Indicator Species) نامیده می شوند (میردار و همکاران ، 1382). 2-2-معرفی استان سمنان موقعیت جغرافیایی استان سمنان با مساحتی برابر ۹۸ هزار و ۵۱۵ کیلومتر مربع، یعنی حدود ۸/۵ درصد از وسعت کل کشور را به خود اختصاص داده است که ازاین لحاظ در سطح کشور دارای رتبه ششم است. این استان از شمال با استان‌های خراسان شمالی، گلستان و مازندران، از جنوب با استان‌های یزد و اصفهان، از شرق با استان خراسان رضوی و از غرب با استان‌های تهران و قم همسایه است. مرکز استان سمنان، شهر سمنان است و از شهرهای مهم آن می توان به دامغان، شاهرود و گرمسار اشاره کرد. شکل 2-1-موقعیت جغرافیایی استان سمنان استان سمنان در دامنه های جنوبی رشته کوه البرز واقع شده که ارتفاع آن از شمال به جنوب کاهش می یابد و به دشت کویر منتهی می شود. این استان به دو بخش کوهستانی و دشت های پایکوهی تقسیم می شود. از دیگر مشخصات جغرافیایی این منطقه وجود شیب با جهت شمال به جنوب است که علت آن مجاورت با سلسه کوه های البرز در شمال و زمین های هموار و کویر در جنوب است. با استناد به مطالعه های زمین‌شناسی، قدیمی‌ترین تشکیلات از سنگ‌های دیرین ‌زیستی تا آبرفت‌های کوارترنری دراین منطقه وجود دارد. سنگ‌های این دوران بیشتر در شمال سمنان، اطراف شهمیرزاد و جنوب ارتفاعات شمال دامغان و شاهرود وجود دارند. به جز «سنگ های دوران دیرین زیستی»، سنگ‌های از «دوران میان زیستی» در شمال شهمیرزاد، «رسوبات دوران ترشیاری» از سمنان تا آهوان و طبقات گچدار در شمال سمنان دیده می‌شوند. همچنین «سنگ‌های دوران کواترنری» از کوه‌های شمالی تا دشت کویر مشاهده می‌شوند. استان سمنان به علت داشتن شرایط جغرافیایی مختلف، دارای آب و هوای متفاوت در مناطق گوناگون به شرح ذیل است: اقلیم نیمه بیابانی شدید که قسمت های از استان از جمله گرمسار و بنکوه را در برگرفته است. اقلیم نیمه بیابانی ضعیف که مشتمل بر قسمت های از سمنان، شاهرود و دامغان است. اقلیم مدیترانه ای گرم و خشک که نوار شمالی استان را شامل می شود. به طور کلی آب و هوای این استان در نواحی کوهستانی هوا سرد، در دامنه کوه ها هوا معتدل و در کنار کویر هوا گرم است. 2-3-چشمه های استان سمنان در این استان چشمه های فراوانی من جمله سه ایستگاه نمونه برداری این پایان نامه (چشمه قل قل، زرابه، کورچشمه ) می باشند: چشمه معدنی تلخ آب، چشمه معدنی شور آب، چشمه معدنی نمک دره، چشمه های آب مراد، آب قولنج، آب گرم و آب سرد سمنان، چشمه شیخ، چشمه سر شهمیرزاد، چشمه روزبه، چشمه هوا خورسو، چشمه جوین، چشمه امام زاده زید، چشمه امام زاده عبداله، و چشمه انگورستانی،... استان سمنان دارای منابع غنی آب زیرزمینی است. عواملی از قبیل گسترش دشت‌های آبرفتی، میزان ریزش باران، کوه‌های آهکی و همچنین وجود طبقات نفوذناپذیر زیرین، باعث فراوانی آب‌های زیرزمینی منطقه شده است. منابع آب زیرزمینی استان بخشی از نیازهای آشامیدنی و کشاورزی منطقه را تامین می‌کند. علاوه بر این، در غرب استان مناطق آهکی وجود دارد که چشمه‌های دائمی از آن‌ها سرچشمه می‌گیرند. سالنامه آماری آب کشور 86 جدول 2-1-تأسیسات و تجهیزات اندازه گیری نزولات جوی استان ها استان باران سنجی تبخیرسنجی سمنان 24 21 مازندران 46 31 مأخذ: شرکت مدیریت منابع آب ایران مرکز استان بارندگی سالا7نه حداکثر بارندگی در روز میلی متر8 متوس9ط دما حداکثر مطلق حداقل مطلق معدل حداقل معدل حداکثر سمنان 18 90.7 19.3 42.2 -6.0 13.5 25.2 ساری 40.6 32.8 25.8 24.8 23.2 24.0 32.8 جدول 2-2-تأسیسات و تجهیزات انداز ه گیری آب های زیرزمینی استان ها نام استان تعداد چاه های پیزومتر تعداد جاه های مشاهده ای تعداد چاه های انتخابی تعداد چشمه های انتخابی تعداد قنوات انتخابی سمنان 18 308 245 29 81 مازندران 99 344 165 37 34 2-4-معرفی مهمترین راستهها و خانوادههای ماکروبنتوزهای موجود در آب های شیرین ایران: 2-5-راسته بهاره ها نام علمی: PLECOPTERA نام انگلیسی:Stone flies pleco یعنی تاخورده و Ptera یعنی بال . علت اینکه بال تاخورده گفته می شود اینست که ناحیه ی مخرجی (anal) بالهای عقبی در هنگام استراحت بصورت تاخورده می باشند. این راسته از حشرات بنام Ston flies مگس های سنگی نیز خوانده می شوند. اغلب حشراتی هستند که اندازه ی بدنشان متوسط تا کوچک بوده و بدن تا حدودی مسطح است ، دارای بدنی نرم بوده و رنگ بدنشان خرمایی کم رنگ است . این حشرات معمولا در اطراف رودخانه ها ویا سواحل صخره ای دریاچه ها یافت می شوند.پلکوپتراها جز حشرات خوب پرواز محسوب نمی شوند و معمولا به ندرت میتوان آن ها را در مسافات طولانی دور از محلی که آب وجود داشته باشد پیدا کرد. اغلب گونه های پلکوپترا دارای چهار بال غشایی می باشند. بال های جلویی طویل و باریک می باشد.بال های عقبی تا حدودی کوتاه تر از بال های جلویی بوده و معمولا دارای یک لوب مخرجی رشد یافته می باشند که در هنگام استراحت شبیه بادبزن دستی دچار تاخوردگی می شود.تعدادی از گونه های پلکوپترا ، بال هایشان یا کوچک شده و یا اصلا فاقد بال هستند. در هنگام استراحت پلکوپتراها بال هایشان را بصورت مسطح درسطح پشتی شکم روی هم قرار می دهند.انتها در پلکوپتراها ططویل باریک واز تعداد زیادی حلقه ها تشکیل شده است.پنجه ی پا از سه پا تشکیل می شود.سرسی ها Cerci در پلکوپترا وجود دارند ودر برخی گونه ها بلند ودر برخی کوتاه می باشد. قطعات دهانی از نوع ساینده است لیکن در برخی از افراد بالغ که تغذیه نمی کنند قطعات دهانی تا حدودی تحلیل رفته است. پلکوپتراها دارای دگردیسی ساده هستند و مراحل پورگی در داخل آب طی می شود . پوره های پلکوپتراها حشراتی هستند که دارای بدنی تا حدودی طویل و مسطح بوده و دارای آنتن های طویل و Cerci های بلند می باشند. از نظر شکل ظاهری شکل این پوره ها شباهت زیادی به پوره ی سنجاقک ها دارد لیکن فاقد یک فیلامان دمی میانی می باشند، به عبارت دیگر پوره های پلکوپتراها همیشه دارای دم می باشند در حالیکه پوره ی سنجاقک ها همیشه دارای سه دم می باشند. پوره های پلکوپتراها دارای دو ناخن در هر پنجه ی پا هستند، در حالیکه پوره های سنجاقک ها فقط دارای یک ناخن در هر پنجه ی پای خویش می باشند واز لحاظ آبششها نیز از یکدیگر متفاوتند، برانشی ها در پوره ی سنجاقک ها بصورت برگه مانند و در دو طرف حلقه های شکم قرار دارند پوره ی پلکوپتراها معمولا در زیر سنگ های موجود در جریان آب ها و یا سنگ های موجود در سواحل دریاچه ها یافت می شوند، و علت اینکه به این حشرات مگس های سنگی گفته می شود نیز بهمین خاطر است ، در عین حال در هر جایی از جریان آب که مواد غذایی بیشتر باشد نیز پوره ی پلکوپتراها یلفت می شوند .برخی از گونه های پلکوپتراها که تعدادشان بسیار اندک است در آب های زیر زمینی بسر می برند، و پوره های این قبیل گونه ها در آب چاه و یا سایر منابع آب یافت می شود . برخی از گونه های پلکوپترا در دوره ی پورگی گیاهخوارند در حالیکه گونه های دیگر آن شکارچی ویا همه چیز خوار Omnivorous می باشند. تعدادی از گونه های پلکوپتراها در طی فصول پاییز و زمستان ، از حالت پورگی خارج شده ، بالغ می شوند ، تغذیه نموده و جفت گیری می کنند. پوره های این قبیل گونه ها معمولا گیاه خوار هستند و افراد بالغ عمدتا از جلبک های سبز-آبی تغذیه نموده و از لحاظ تغذیه ای جزء جانوران روز فعالDiurnal می باشند. گونه هایی که در طی تابستان بالغ می شوند از لحاظ عادات تغذیه ای پورگی متفاوتند و برخی از آن ها در حالت بالغ نمی نمایند. در بسیاری از گونه های پلکوپتراها جنس های نرو ماده در اثر سیگنال های صوتی به طرف یکدیگر جلب می شوند. نرها با زدن انتهای شکم به ماده زمینه ای که در آن قرار دارند ، صدایی بوجود می آورند. افراد ماده نیز در جواب کمی بعد از شنیدن صدای نرها به نوبه ی خودشان با ایجاد ضربانات مشابهی جواب می دهند. رده بندی پلکوپتراها Classification of plecoptera : در آمریکای شمالی حشرات متعلق به راسته ی پلکوپترا بر مبنای ساختمان لب پایین به دو دسته خانواده تقسیم می شوند. حشره شناسان مختلف تعداد متفاوتی از خانواده ها را در راسته ی پلکوپترا تشخیص داده اند. در این رده بندی بر طبق طبقه بندی که Stark و همکاران در سال 1986 میلادی انجام داده اند ، می باشد. آنان نه خانواده از پلکوپتراها را در آمریکائی تشخیص داده اند. رده بندی استارک در سطور زیر آورده شده است: دسته ی Euholognata(Filipalpia , Holognata) Group خانواده ی تنیو پتریجیده Taeniopterygidae یا مگس های سنگی زمستانی Winter stoneflies خانواده ی Nemouridae یا مگسهای سنگی بهاری Spring stoneflies خانواده ی Leuctridae یا مگس های سنگی با بال های روی هم پیچیده Rolled winged stoneflies خانواده ی Capniidae یا مگس های سنگی کوچک زمستانی Small winter stoneflies Systellognatha خانواده ی Pteronarcydae یا مگس های سنگی عظیم الجثه Giant stoneflies خانواده ی Pteroperlidae یا مگس های سنگی شبیه سوسری ها Roach like stoneflies خانواده ی Perlidae یا مگس های سنگی معمولی Common stoneflies خانواده Perlodidae خانواده Chloroperlidae یا مگس های سنگی سبزGreen stoneflies صفات عمده ای که برای تشخیص خانواده های پلکوپتراها از یکدیگر مورد استفاده قرار می گیرد عبارتند از : رگبال بندی بال ها ، صفات مربوط به پنجه پا و نیز بقایای برانشی ها که بروی قسمت پشتی قفسه سینه باقی مانده اند.در نمونه های پلکوپترا که سوزن زده می شوند و خشک شده نگه داری می شوند، به علت اینکه باقی مانده ی اثر برانشی ها بروی قسمت پشتی قفسه ی سینه چروکیده شده است قابل دیدن و تشخیص نمی باشد. مشخصات مربوط به بقایای برانشی موجود بر قسمت پشتی قفسه ی سینه در نمونه هایی که در الکل نگهداری می شوند به مراتب نسبت به نمونه هایی که بصورت خشک شده نگهداری می شوند آسانتر قابل تشخیص است. جمع آوری و نگهداری نمونه های پلکوپتراها : در طی روزهای پاییز و گرم زمستان و نیز در بهار افراد بالغ گونه های زمستانی پلکوپتراها را می توان در حال استراحت بر روی پل های رودخانه ، روی نرده های جلوی خانه ها و سایر اشیا نزدیک جریان های آب که پوره ها در آن بسر می برند پیدا نمود.بسیاری از گونه های پلکوپتراها را می توان با تور حشره گیری برای علف هایی که در طول ساحل رودخانه می رویند بدست آورد. پل ها در تمام طول سال محل استراحت مناسب برای بسیاری از گونه های پلکوپتراها محسوب می شوند.بسیاری از گونه های تابستانی پلکوپتراها جذب نور می شوند.پوره های پلکوپتراها را می توان در جریان های آب ، معمولا در زیر سنگ ها و یا در گل و لای بستر رودخانه ها پیدا نمود. پوره ها و افراد بالغ پلکوپتراها را می بایست در الکل نگهداری کرد.افراد بالغ پلکوپتراها در صورت خشک شده و سوزن زده شده نگهداری شوند، چروکیده شده و برخی از اندام های بدنشان ژنیتالیا و یا بقایای آبشش شان قابل تشخیص نخواهد بود. صفات عمده ای که برای تشخیص خانواده های پلکوپتراها از یکدیگر مورد استفاده قرار می گیرد عبارتند از: رگبال بندی بالها ، صفات مربوط به پنجه ی پا و نیز بقایای برانشی ها که بروی قسمت پشتی قفسه ی سینه باقی مانده اند. در نمونه های پلکوپترا که سوزن زده می شوند و خشک شده نگه داری می شوند ، به علت اینکه باقی مانده اثر برانشی ها به روی قسمت پشتی قفسه ی سینه چروکیده شده است قابل دیدن و تشخیص نمی باشد. اثر باقی مانده از برانشی ها بروی قفسه ی سینه در پلکوپتراهای بالغ در شکل ( - ) نشان داده شده است . مشخصات مربوط به بقایای برانشی موجود بر قسمت پشتی قفسه ی سینه در نمونه هایی که در الکل نگهداری می شوند به مراتب نسبت به نمونه هایی که بصورت خشک شده نگهداری می شوند آسان تر قابل تشخیص است. 2-6-راستهیکروزهها: نام علمی : EPHEMEROPTERA نام انگلیسی : May flies یک روزه ها حشراتی با اندازه ی کوچک تا متوسط ، دارای بدنی طویل و نرم می باشند . اغلب افراد بالغ در نزدیکی جریان های آب دیده می شوند.در افراد بالغ بال جلویی بزرگ ، مثلثی شکل و دارای رگبال های متعدد است. بال های عقبی کوچک و گرد می باشند(به ندرت ممکن است که فاقد بال های عقبی باشند). در هنگام استراحت بال ها عمود بر بدن، قرار می گیرند.انتهای شکم دارای دو یا سه دم مو مانند است. آنتن ها کوتاه و بریسل مانند می باشند و نا مشخص هستند. پنجه ی پا از سه تا پنج حلقه تشکیل شده است . قطعات دهانی کوچک مانده است . دارای دگردیسی ساده هستند. دریافت فایل شناسایی و مقایسه تنوع گونه ای ماکرو بنتوزهای چشمه های باداب سورت،زرابه،قل قل و کورچشمه در استان های سمنان و مازندران

شناسایی جهش در ژن آنژیوتانسین بیماران مبتلا به آترواسکلروزیس مراجعه کننده به بیمارستان افشار یزد

شناسایی جهش در ژن آنژیوتانسین بیماران مبتلا به آترواسکلروزیس مراجعه کننده به بیمارستان افشار یزد چکیده : آترواسکلروزیس "بیماری اصلی عروق کرونر قلب" بیماری است که بر روی شریان های بزرگ و متوسط بدن ​​تاثیر می گذارد. انواع متفاوتی از سلول ها، اندام ها و شماری از فرآیندهای فیزیولوژیکی در این عارضه درگیر هستند. سیستمRAAS یک سیستم مهم در تنظیم فشارخون، آب و الکترولیت های بدن انسان و سایر موجودات زنده است. مطالعه وسیعی روی واریانت های ژن های کد کنندۀ این سیستم، که باعث گسترش فشار خون و بیماری آترواسکلروزیس می گردد، صورت گرفته است. ژنAGT نخستین ژنی است که با فشارخون بالا ارتباط دارد و واریانت های این ژن احتمالا با افزایش فشارخون و گسترش آترواسکلروزیس مرتبط هستند. این مطالعه بر روی دومین اگزون ژن AGT (آنژیوتانسین) بر روی 70 فرد مبتلا به آترواسکلروزیس انجام گرفت. پس از استخراج DNA از نمونه ها و PCR ، ژن تکثیر شده با روش SSCP 5 برای یافتن پلی مورفیسم یا تغییرات جدید در ژن، مورد بررسی قرار گرفت. هفت مورد از نمونه های دارای شیفت باندی برای تعیین ماهیت تغییر، تعیین توالی شدند. در این بررسی دو جهش در موقعیت های 4543T>C و 4360C>T مشخص شد، که در جهش اول متیونین موقعیت 268 به تروئونین (M268T) و در جهش دوم در کدون 207 اسیدآمینه تروئونین به متیونین (T207M) تبدیل می گردد. این تغییرات احتمالا افزایش غلظت های پلاسمایی AGT و افزایش فشارخون را به همراه دارند. کلمات کلیدی: آترواسکلروزیس، آنژیوتانسینوژن، PCR-SSCP، موتاسیون، آنژیوتانسین 2، فشار خون بالا عنوان فهرست مطالب صفحه 1 فصل اول: مقدمه 1 1- 1 بیماری های قلبی 2 1-2 تعریف آترواسکلروزیس 2 1-3 عواملی که در ایجاد آترواسکلروزیس حضور دارند 3 1-3-1 سلول های درگیر در آترواسکلروزیس 3 1-3-2 اکسیداسیون و آترواسکلروزیس 6 1-3-3 التهاب و استرس های اکسیداتیو 7 1-3-4 شکل گیری پلاک ها 9 1-3-5 آشفتگی در مکانیسم های حفاظتی 9 1-4 عواملی که خطر بیماری آترواسکلروزیس را افزایش می دهد 10 1-4-1 کاهش غلظت HDL-C 10 1-4-1-1 ژنتیک های HDL – C 11 1-4-1-2 نقش های متفاوت HDL – C 11 1-4-2 افزایش فشارخون 16 1-4-2-1 سیستم های درگیر در فشارخون 16 1-4-3 سیگارکشیدن 17 1-4-4 ژنتیک و آترواسکلروزیس 17 1-4-4-1 ژنتیک های Dyslipidemia 17 1-4-4-2 پلی مورفیسم های ژنتیکی در نیتریک اکسیدسنتاز اندوتلیالی 18 1-4-4- 3 پلی مورفیسم هادر گلوتاتیون پراکسیداز ( GPx ) 18 1-4- 4-4 پلی مورفیسم های افزایش هموسیستئین 19 1-4-4-5 پلی مورفیسم هایی در فیبرینوژن 19 1-4-4-6 واریانت های میتوکندریایی 20 1-4-5 نقش آلودگی 21 1-5 عواملی که در آترواسکلروزیس جلوگیری می کند 21 1-5-1 استروژن ها 21 1-5- 2 آنتی اکسیدان ها و عمکرد آنها 21 1-5-3 پرهیزهای غذایی 22 1-5-4 ورزش 23 1-6 سیستم RAAS و عملکرد آن 23 1-7 طبقه بندی ترکیبات RAAS و ویژگی شان 25 1-7-1 رنین 25 1-7-2 آنژیوتانسینوژن ، آنژیوتانسین 1 و 2 25 1-7-3 آنزیم مبدل آنژیوتانسین 1 (ACE ) و آنزیم مبدل آنژیوتانسین 2 ( ( ACE2. 26 1-7-4 رسپتورهای 1 و 2 27 1-8 التهاب و سیستمRAAS 29 1-9 واریانت ها در ژن AGT 30 1-10 RAAS موضعی 30 1-10-1 RAAS موضعی در قلب 31 1-11 تولید آنژیوتانسین بافتی 31 1-11- 1 تولید آنژیوتانسین در جریان درونی ( بین شکاف ) 31 1-11-2 تولید آنژیوتانسین در غشاء سلولی 32 1-11-3 تولید آنژیوتانسین در داخل سلول 32 1-12 تاثیرات RAAS روی سلول های قلبی 33 1-13 تاثیرات RAAS روی جریان کرونری 34 1-14 تاثیرات RAAS روی جریان منظم شریان 34 1-15 جداسازی و خالص سازی DNA 36 1-16 واکنش زنجیره پلی مراز 38 1-16-1 مراحل اصلی در واکنش زنجیرۀ پلی مراز 39 1-16-2 طراحی پرایمر 40 1-16-3 دمای اتصال پرایمر 41 1-17 الکتروفورز 42 1-18 روش آشکارسازی اسیدنوکلئیک 43 1-19 یافتن جهش ها با روش PCR – SSCP 44 1-20 تعیین توالی بازهای DNA 46 1-21 مروری بر مطالعات گذشته 48 1-22 اهداف تحقیق 52 2 فصل دوم : مواد و روش ها 53 2-1 مشخصات بیماران 54 2-2 بافرها و محلول ها 55 2-2-1 روش تهیه EDTA 55 2-2-2 روش تهیه الکل 75/ 55 2-2-3 روش تهیه پرایمرها 55 2-2-4 روش تهیه اتیدیوم بروماید 55 2-2-5 روش تهیه بافر TBE 10X 56 2-2-6 روش تهیه بافر TBE ./5X 56 2-2-7 روش تهیه لودینگ بافر PCR 56 2-2-8 روش تهیه لودینگ بافر SSCP 57 2-2-9 روش تهیه محلول NAOH 57 2-2-10 روش تهیه آمونیوم پرسولفات 10/. 57 2-3 کیت استخراج DNA 57 2-4 تکنیک PCR 59 2-4-1 شرایط تکثیر قطعه مورد نظر 60 2-4-2 مراحل PCR 61 2-5 الکتروفورز ژل آگاروز 61 2-6 آنالیز ژل SSCP 62 2-7 آماده سازی ژل پلی آکریل آمید 62 2-8 مراحل رنگ آمیزی ژل SSCP 63 3 فصل سوم : نتایج 64 4 فصل چهارم : بحث و نتیجه گیری 72 4-1 نتیجه گیری 76 4- 3 پیشنهادات 77 4-4 مراجع 78 عنوان فهرست شکل ها صفحه شکل 1-1: مکانیسم پیشنهادی در وقوع آترواسکلروزیس 10 شکل 1-2 : خلاصه ای از تاثیرات HDL-C 15 شکل 1-3 : کل عملکرد سیستم RAAS 24 شکل 1-4 : مسیر کلاسیک و غیر کلاسیک RAAS 28 شکل 1-5 : ساختار پروتیین های درگیر در سیستم RAAS 29 شکل 1-6 : طرح پیشنهادی تولید آنژیوتانسین 1 و 2 درقلب 33 شکل 1-7 : تاثیرات آنژیوتانسین 2 روی قلب 35 شکل 1-8 : مراحل زنجیره پلی مراز 40 شکل 1-9 : ژل الکتروفورز 43 شکل 1-10 : روش SSCP 46 شکل 3-1 : تصویری از الکتروفورز محصول PCR نمونه های مورد مطالعه بر روی ژل آگاروز 65 شکل 3-2 : تصویری از آنالیز SSCP روی ژل پلی آکریل آمید 66 شکل 3-3 : تشخیص جهش 4360C>T با استفاده از تکنیک SSCP و تعیین توالی 67 شکل 3-4 : تشخیص جهش 4543T>C با استفاده از تکنیک SSCP و تعیین توالی 67 شکل 3-5 : هم ردیفی نوکلئوتید برای تغییر 4360C>T 68 شکل 3-6 : هم ردیفی نوکلئوتید برای تغییر4543T>C 65 شکل 3-7 : هم ردیفی پروتیین برای تغییر T207M 66 شکل 3-8 : هم ردیفی پروتیین برای تغییر M268T 66 شکل 3-9 : نتیجه Blastn برای جهش 4360C> T همولوگ با حیوان pan paniscus 67 شکل 3-10 : نتیجه Blastn برای جهش 4543T> C همولوگ با حیوان pan paniscus..... 67 عنوان فهرست جداول صفحه جدول 1-1 : فعالیت های رسپتور نوع یک و دو آنژیوتانسین 2 28 جدول 1-2 : مواد لازم جهت تهیه ژل SSCP با درصدهای مختلف 45 جدول 2-1 : مشخصات بیماران 55 جدول 2-2 : مشخصات پرایمر در این مطالعه 59 جدول 2-3 : مقدار مواد مورد استفاده در مخلوط PCR در حجم Lµ25 60 فصل اول: مقدمه 1 1 بیماریهای قلبی: بر طبق آمار منتشر شده بیماری های قلبی در سال 2012، هر ساله در آمریکا حدود 795000 نفر با حمله قلبی مجدد (عود کننده) مشاهده می شوند، و در هر 40 ثانیه یک نفر از هر 18 نفر در نتیجه حمله قلبی دچار مرگ می شود. سالانه میلیون ها دلار صرف هزینه های درمان بیماری های قلبی می گردد. اگرچه میزان مرگ و میر در بیماران قلبی کاهش یافته است، اما ظرفیت باقی مانده هنوز هم بالا است (1). 2 تعریف آترواسکلروزیس: تصلب شرایین یا سختی رگ ها (آترواسکلروزیس)، یک بیماری عروقی است و نوعی از آرتریواسکلروزیس (Arteriosclerosis) است که با رسوب لیپید و مواد دیگر بر روی دیواره داخلی برخی رگ ها مشخص می گردد. نتیجه این فرآیند تشکیل پلاک های فیبری- چربی (آتروما) بوده که با افزایش سن رفته رفته زیاد می شود و موجب تنگی رگ و یا دیگر عواقب می گردد (2). تصلب شرایین یکی از دلایل عمده مرگ و میر بزرگسالان در جوامع پیشرفته است، به طوری که در ایالات متحده آمریکا به تنهایی سالانه حدود 112 میلیارد دلار هزینه در بر دارد (3) . آرتریواسکلروز یک اصطلاح کلی برای ضخیم‌شدن و سفتی دیواره شریانی است (تصلب شرایین). یک نوع آرتریواسکلروز، آترواسکلروز است این بیماری در شریانهای بزرگتر ایجاد می‌شود. در این بیماری عروق و رگ‌ها حالت ارتجاعی خود را از دست ‌می‌دهند و قطر عروق تغییر می‌کند. بالا بودن کلسترول خون، فشار خون بالا، عوامل ژنتیک و مصرف سیگار احتمالاً مهم‌ترین عوامل دخیل در ایجاد آترواسکلروز هستند. آترواسکلروز با ایجاد سکته قلبی و مغزی مهم‌ترین عامل مرگ ‌و میر در جوامع غربی است (3). آرﺗﺮیواﺳکلروز در ﻣﺮدان ﺷایع ﺗﺮ اﺳﺖ. افزایش میزان پراکسیداسیون لیپیدی از علل اصلی شروع و پیشرفت آرتریواسکلروز محسوب می‌گردد (3). 1- 3 عواملی که در ایجادآترواسکلروزیس نقش دارند: 1-3-1 سلول های درگیر در آترواسکلروزیس: آترواسکلروزیس یک بیماری چند مرحله ای است که با تجمع اندوتلیال محتوی ApoBشروع می شود (4و6). تغییراتی مثل اکسیداسیون و هیدرولاسیون، فعالیت سلول های اندوتلیال را پیش می برد. این سلول ها مواد جاذب ترشح کرده که کموکاین3 نامیده می شود که با رسپتور های سطح منوسیت4 واکنش می دهند (4و6) .منوسیت ها به تنهایی با اینتگرین5 ها در سلول های اندوتلیال برهم کنش می دهند. بعد از اتصال، یک مرحلهی توقف اتفاق می افتد و سپس منوسیت ها به فضای زیراندوتلیال وارد می گردند (4و6). ورود منوسیت ها به داخل اندوتلیال با ماکروفاژها متفاوت است. این مرحله با واکنش های ماتریکس داخل سلولی و سایتوکاین هایی مثل فاکتور محرک کلونی ماکروفاژیو یکسری فاکتورهای نکروزی توموری2 صورت می گیرد (4و6). LDL3 اکسیده، توسط رسپتورهای لاشخوری نوع A (SRA) 4 و CD36 در ماکروفاژها برداشت می گردد. استرهای کلسترول در ذرات apoB به کلسترول آزاد 5 هیدرولیز می گردد. کلسترول آزاد به داخل شبکه ی آندوپلاسمی رها شده و دوباره با استیل COA استری می گردد و به صورت استرهای کلسترول انتقال می یابد. انتقال هم توسط ACAT16در ماکروفاژها صورت میگیرد. ACAT1 در شکل گیری سلول های کف آلود7 در دیوارهی شریان و گسترش آترواسکلروزیس شرکت دارد. تشکیل هستههای نکروزی و پوشش لیفی مانند8، توسط ماکروفاژها باعث آسیب شریان است (4و6). متالوپروتئینازهای ماتریکسی مشتق شده از ماکروفاژها (MMps)10 یک خانواده از پروتئین ها هستند که تخریب ماتریکس داخل سلولی (ECM)11، را بر عهده دارند. که نتیجهی تخریب، جدایی پلاک ها است. البته ماکروفاژها، باعث نازک شدن و افزایش آسیب پذیزی پلاک را از طریق آپوپتوز سلول های ماهیچه ای صاف، که کاهش شمار سلول های ماهیچه ای صاف است را نشان می دهند (4و7). ماکروفاژها هم چنین آپوپتوز را در سلول های ماهیچه ای صاف با ترشح TNF-α و اکسید نیتریک تشدید می کنند. ماکروفاژها با ترشح TNF-β ممکن است مانع سلول های همسایه SMCs 3 در القاء سنتز کلاژن شوند. حتی بعد از جدایی پلاک، ماکروفاژها یک نقشی در ترشح فاکتور پروتوترومبیک بافتی4 که شکل گیری پلاک را سریع تر می کند بازی می کنند. هسته های نکروزی تولید شده در ترکیب آپوپتوزی، در افزایش تجمع ماکروفاژها نقش دارد. هسته های نکروزی هم چنین در التهاب و ایجاد لخته، جدایی پلاک ها و استرس های فیزیکی روی پوشش لیفی شکل شرکت دارد (4و6). اکنون پذیرفته شده است که آترواسکلروزیس یک بیماری مزمن دیواره شریان است که هر دو سیستم ایمنی در آن درگیر است. سلول های دندریتیک5 یک جمعیت متفاوت از سلول ها هستند که از مغز استخوان مشتق شده اند و به طور اختصاصی در به دام انداختن و ارائه آنتی ژن به لنفوسیت های T6 نقش دارند. این سلول ها در از بین بردن آنتی ژن های داخل سلولی که با فاگوسیتوز7 و اندوسیتوز8 با واسطه رسپتور وارد می شوند، کارآمد هستند. سپس این سلول ها قطعه ای از آنتی ژن را نشان می دهند که به MHCII9 باند می شود و به وسیله ی سلول های T با CD4+ شناسایی می گردد. سلول های دندریتیک یکسری پیام های کمک تحریکی مثلB7-1 یاB7-2 که سلول های T با +CD4 را تحریک می کند، تولید می کنند. سلول های T و DCs به طور خوشه ای آرایش می یابند که اصولا در مناطق مستعد پلاک قرار دارند (4و5). 1-3-2 اکسیداسیون و آترواسکلروزیس نتیجه اختلال در عملکرد اندوتلیال، ضخامت دیواره ی رگ، در نتیجه رسوب مواد چربی و پلاک ها است (23). ارتباطی بین فاکتورهای خطر آترواسکلروزیس (ARFs)و افزایش تولید شریانی ROS2 وجود دارد. بیشترین اهمیت این فاکتورها این است که موروثی هستند (23). ROS وRNS 3 باعث آزادسازی سیتوکروم C میتوکندریایی می شود. و مسیرهای مرگ طبیعی را پیش می برند. تولید موضعی RNS ممکن است با آسیب بافت شریانی همراه باشد (23). سطوح بالای ROS در مسیر آپوپتوز طبیعی و آسیب بافتی در وضعیت های پاتوفیزیولوژیکی به عنوان یک قسمت تثبیت کننده پلاک های آترواسکلروزیس به شمار می رود (23). یک مکانیسم درگیر، در ox- LDL4 و NOS5 در رویداد آترواسکلروزیس پیشنهاد شده است: ox-LDL، آزادسازی اینترلوکین 1 از سلول های اندوتلیال و ماکروفاژها را تحریک می کند به علاوه NO، اتساع عروق6 و اثرات سایتوکاین ها و ملکول های چسبندهی مرتبط با آترواسکلروزیس را مهار می کند. ox- LDL اختلال در عملکرد اندوتلیال را ایجاد می کند. رادیکال های اکسیژن ممکن است به طور غیر مستقیم دلیل اختلال در عملکرد اندوتلیال با کاهش NO می باشد (8و23). به طور ویژه، سوپراکسیدها ی تولید شده سریع با NO واکنش داده که نتیجهی آن تشکیل پراکسی نیتریت و از دست رفتن فعالیت زیستی NO است (8و23). ROS و پراکسی نیتریت می توانند تتراهیدروبیوپترین که کوفاکتور2 حساس برای NO سنتاز اندوتلیالی است را اکسید کنند و فعالیت آن را مهار کنند (8و23). در رویداد آترواسکلروزیس و ایسکمی قلبی، NO نقش مهمی در جلوگیری از عملکرد نامناسب اندوتلیال بازی می کند و در مقابل رادیکال های اکسیژن محافظت می کند. NOهم چنین از آپوپتوز و اختلال در عملکرد میتوکندریایی جلوگیری می کند (8و23). 1-3-3 التهاب و استرس های اکسیداتیو: مطالعات روی سیستم ایمنی و افزایش فشار خون نشان دهندهی یک ارتباط نزدیک بین نفوذ سلول های التهابی و استرس های اکسیداتیو در بافت های قلبی است. در حقیقت یکی از مکانیسم های اصلی در سیستم RAAS که علت بیماری قلبی است، افزایش فشار خون با تولید گونه های اکسیژن فعال است (20و31). رادیکال های آزاد می توانند با همه ی ملکول های زیستی برهم کنش داشته باشند. شامل لیپیدها، پروتئین ها، نوکلئیک اسید ها، کربوهیدرات ها و اکسید نیتریک (NO) که در رشد وتقسیم سلولی، که ماتریکس سلولی را افزایش می دهد نقش دارد نتایج تولید ROS روی شریان قلبی، آسیب سلولی و اختلال در عملکرد اندوتلیال است (20و31). اخیر مکانیسم هایی که چگونه، RAAS به افزایش ROS کمک می کند مشخص شده است: Ang22 و آلدوسترون هر دو بیان NADPH اکسیداز را القاء می کنند که آنزیم اصلی در تولید سوپراکسید بافت شریانی است. رادیکال های آزاد در حقیقت به عنوان فعال کننده های التهاب عمل می کنند. استرس های اکسیداتیو نفوذپذیری شریان را تحریک می کنند. و باعث افزایش ترشح واسطه های التهابی مثل پروستاگلاندین ها و فاکتورهای رشد اندوتلیالی شریانی (VCAM-1) 3 می گردند (31). Ang2 بیان ملکول های چسبندگی (VCAM- 1) و ملکول چسبندگی داخل سلولی 1 (ICAM- 1) 4 و E- سلکتین5 که در مسیر تولیدات ROS درگیر است را افزایش می دهد. هجوم سلول های التهابی باعث بزرگ شدن دیواره رگ می گردد. که غنی ازNADPH اکسیداز و افزایش استرس های اکسیداتیو موضعی است. در مرحله ی پایانی، مکانیسم های ترمیم بافت به وسیله ی استرس های اکسیداتیو ظاهر می گردد (31). Ang2 و آلدوسترون باعث افزایش فشار خون و هیپرتروفی و آپوپتوز و فیبروس2 شریانی می شوند. که نتیجهی آن تقسیم سلولی و خروج ماتریکس و کلاژن های اصلی و فیبرونکتین است که با تغییر شریان و افزایش سفتی شریان همراه است (31). 1-3- 4 شکل گیری پلاک ها: شکل گیری پلاک در منطقه ای دور از استرس های شریان، که تقریبا در شاخه های شریان است اتفاق می افتد. این فرضیه مرتبط با الاستین در این جایگاه و حضور کمپلکسهای کلاژن - پروتوگلیکان است که مسبب حبس LDL است. جدایی پلاک به طور معمول علت سندرم شریان کرونری است (25). 1-3-5 آشفتگی در مکانیسم های حفاظتی: آشفتگی در شناسایی مکانیسم های حفاظتی ذاتی در اندوتلیوم، دلیل تشکیل ترومبین3(ماده انعقاد) است (25). انسداد شریان کرونر، تشکیل لخته خون، جدایی پلاک ها، در ناحیه ای از آترواسکلروزیس، مربوط به 60 تا 80 درصد از موارد سندرم کرونر حاد (ACS)4 است (25). التهاب ، واسطه ی رگ دار شدن5 و انتقال خون به داخل پلاک ها، به تنهایی با بافت مردگی6 در مرکز پلاک همراه است که اغلب ایجاد لخته می کند. مکانیسم کلی ایجاد آترواسکلروزیس در شکل1-1 آمده است (25). شکل 1-1 : مکانیسم پیشنهادی در وقوع آترواسکلروزیس (25). 1- 4 عواملی که خطر بیماری آترواسکلروزیس را افزایش می دهد: 1-4-1 کاهش غلظت HDL- C: کلسترول خالص (HDL- C) بیشترین نشانه برای آترواسکلروزیس است. مطالعات اپیدمیولوژی نشان داده که سطوح HDL- C پایین ، خطر بیماری CVD را افزایش می دهد. زمانی که (HDL- C) به عنوان یک فاکتور خطر تایید می گردد. خطر باقی مانده مرتبط با عملکرد های لیپوپروتئین های دیگر است (24). 1-4 -1 -1 ژنتیک های HDL: همه ی شکل های ژنتیکی با HDL- C پایین و apoA- I مرتبط با افزایش خطر بیماری CVD نیست. اخیرا جهشهایی در ژن ABCA1 در بیماری Tangier با افزایش خطر بیماری قلبی مرتبط نیست. موتاسیون های دیگری در apoA- I که علت پایین HDL- C و apoA- I است مرتبط با CVD زودرس نیست. اخیرا ژن های مرتبط با افزایش درغلظت HDL- C (اندوتلیال لیپاز وCETP) ارتباطی با کاهش خطر بیماری قلبی ندارد (24). 1-4-1-2 نقش های متفاوتC-HDL: 1 . آنتی اکسیدان2 HDL- C از فرم های آسیب رسان LDL OX-در چندین مکانیسم جلوگیری می کند (24). آنزیم های مختلفی وجود دارد که گلوتاتیون سلنوپراکسیداز و Paraoxonaas1 (PON1) که اکسیداسیون لیپیدها یا تخریب لیپیدهای هیدرو پراکسید را ایجاد می کنند و روی HDL- C حضور دارند را کاهش می دهد (24). 2 . فعالیت ضد التهابی آترواسکلروزیس یک بیماری التهابی است. HDL- C از التهاب رگ ها در مسیرهای متفاوت جلوگیری کرده است. HDL-C بیان فاکتور نسخه برداری هسته ای NF- Kb که ملکول های چسبندگی سلولی را فعال و با کمپلکس AI/ABCA1 ماکروفاژی برهم کنش می دهد را تغییر می دهد (24). دریافت فایل شناسایی جهش در ژن آنژیوتانسین بیماران مبتلا به آترواسکلروزیس مراجعه کننده به بیمارستان افشار یزد

نیمه تاریک وجود

نیمه تاریک وجود در این کتاب بی نظیر، دبی فورد به شیوه ای منظم، گام های رسیدن به یکپارچگی و دگرگونی را مشخص می کند. اگر می خواهید زندگی تان دگرگون شود، این کتاب را بخوانید و تمرین های آن را انجام دهید و بدانید غیر ممکن است که این کتاب را درک کنید و دگرگونی ژرفی در زندگی احساس ننمایید! دبی فورد شما را از الگوهای تنبیه خود که اغلب اسیرمان کرده اند، عبور می دهد. نظرات او به گونه ای خارق العاده، جذاب و قانع کننده هستند. دبی فورد در این کتاب منحصر به فرد به شما می آموزد که تمامی جنبه های خود را بشناسید، بپذیرید و سرانجام دوست بدارید .این همه بیگانگی با خود از چه روست؟ دیر آشنایی کافی ست! اگر خواهان یکپارچگی وجود خود هستید، اگر از قطعه، قطعه و پاره پاره بودن جانتان رنج می برید، از تاریکی های درون پروا مکنید! تاریکی همیشه جایگاه پلیدی ها و زشتی ها نیست. ای بسا موهبت های نیک و زیبا که در سایه نادیده انگاری های ما در نیمه تاریک وجودمان خفته اند. دریافت فایل نیمه تاریک وجود