عنوان فهرست اشکال شماره صفح
شکل1-1
سیستم درجه بندی مطالعه جهانی
ریفلاکس...........................................................................................................3
شکل2-1
اتصال
یوترووزیکال...........................................................................................................................................................4
شکل3-1
نمایی از کانال حالب درون دیواره
مثانه......................................................................................................................7
شکل4-1
مثال های کلینیکی از مطالعه
ریفلاکس.....................................................................................................................9
شکل5-1
VCUG در کودک 4 ساله نشان دهده برگشت دو طرفه ادرار
.........................................................................12
شکل6-1 نقشه ژن TGF-beta1
انسانی....................................................................................................................................23
شکل7-1
تصویر شماتیک نحوه انجام PCR
...........................................................................................................................26
شکل8-1
روش های آنالیز برای مطالعات وابستگی SNP
....................................................................................................29
شکل1-3
تصویر مربوط به بررسی نتیجه استخراج DNA روی ژل
آگارز..........................................................................40
شکل1-4
قطعه حاصل از تکثیر پی سی آر (808 جفت
باز)...............................................................................................50
شکل2-4
سه ژنوتیپ حاصل از هضم
آنزیم...............................................................................................................................50
عنوان فهرست جداول شماره صفحه
جدول1-1
ژنها و مکان های ژنی بالقوه دخیل در تکامل کلیه و یا مثانه
.............................................................................24
جدول
1-3 مربوط به متغیرهای
تحقیق.....................................................................................................................................39
جدول
2-3 پرایمرها
اختصاصی.....................................................................................................................................................41
جدول
3-3 مواد و مقادیر لازم برای واکنش هضم آنزیمی یک
نمونه...................................................................................45
جدول
4-3 محاسبه مرحله به مرحله ژنوتیپ های مورد
انتظار............................................................................................46
جدول
1-4 فراوانی ژنوتیپ های CC،TC و
TT...................................................................................................................51
جدول
2-4 فراوانی ژنوتایپ های CC،TC و
TT...............................................................................................................53
جدول 3-4 آزمون کای اسکوئر در دو گروه کودکان مبتلا به ریفلاکس و کودکان سالم.................................................53
جدول
4-4 تخمین ریسک برای هنگامی که cc رفرنت فرض
شده.....................................................................................53
جدول5-4
فراوانی ژنوتایپ های CC،TC و TT
.................................................................................................................54
جدول6-4
آزمون کای اسکوئر ژنوتیپ TT رفرنت در نظر گرفته می
شود........................................................................54
جدول
7-4 تخمین ریسک برای هنگامی که TT رفرنت فرض
شده...................................................................................55
جدول8-4
فراوانی آلل های T و
C..............................................................................................................................................55
جدول9-4آزمون
کای اسکوئر برای بررسی آلل های Tو
C....................................................................................................56
جدول10-4
تخمین ریسک برای آلل ها
TوC.........................................................................................................................56
جدول11-4
فراوانی ژنوتیپ های مشاهده شده و مورد انتظار در گروه کودکان مبتلا به
ریفلاکس
وزیکویورترال.....................................................................................................................................................................................57
جدول12-4 آزمون کای اسکوئر نیکویی برازش برای بررسی HWE در کودکان مبتلا ................................................58
جدول13-4فراوانی ژنوتیپ ها ی مشاهده شده و مورد انتظار در گروه کودکان سالم......................................................58
جدول14-4 آزمون کای اسکوئر نیکویی برازش برای بررسی HWE در گروه کودکان سالم........................................59
جدول15-4
محاسبه sem داده ها در
spss.............................................................................................................................59
جدول
1-5 مقایسه کلی نتایج ژنوتیپ ها و آلل های مورد
مطالعه......................................................................................63
چکیده فارسی
مقدمه
و هدف: دسته بندی فامیلی ریفلاکس وزیکویورترال پیشنهاد می دهد که
فاکتورهای ژنتیکی نقش مهمی در پاتوژنز ریفلاکس وزیکویورترال دارند. TGF-β1
یک پپتید چند عملکردی است که کنترل رشد و تمایز را در بسیاری از انواع سلول
ها بر عهده دارد. پلی مورفیسم های TGF-β1 با احتمال ابتلا به VUR و UTI
مرتبط می باشند. با توجه به اهمیت پلی مورفیسم T509C- ژن TGF-β1 و ارتباط
آن با ریفلاکس وزیکویورترال اولیه، در این مطالعه تلاش کردیم ارتباط این
پلی مورفیسم با بیماری ریفلاکس وزیکویورترال را پیدا کنیم.
روش کار: این
مطالعه شامل 160 نمونه و کنترل بود، ژنوتایپینگ با روش PCR-RFLP انجام
گرفت و محصولات PCR توسط آنزیم BSU36I مورد هضم آنزیمی قرار گرفتند و سپس
بر روی ژل آگارز 3 درصد بررسی شدند و در نهایت داده ها با استفاده از نرم
افزار SPSSv.19 مورد تجزیه تحلیل آماری قرار گرفتند.
نتایج: فراوانی
ژنوتیپ TT در گروه بیماران افزایش قابل توجهی نسبت به گروه کنترل داشت( 30
درصد بیمار در مقابل 5/7 درصد شاهد 0/0 PV≤) ،اگر چه فراوانی ژنوتیپ CC
کاهش قابل توجهی نسبت به گروه کنترل داشت (5/32 درصد بیمار در مقابل
75/58درصد شاهد 001/0 PV≤). همچنین، فراوانی آلل Tدر گروه بیماران افزایش
قابل توجهی نسبت به گروه کنترل داشت( 75/48 درصد بیمار در مقابل37/24 درصد
شاهد 00/0 PV≤ ) و فراوانی آللC نیز در گروه بیماران کاهش قابل توجهی را
نسبت به گروه کنترل نشان داد ( 25/51درصد بیمار در مقابل 62/75 درصد شاهد
00/0 PV≤ ) .
نتیجه گیری: یافتههای این مطالعه برای اولین بار ارتباط
پلی مورفیسم TT509- TGF-β1 با بیماری ریفلاکس وزیکویورترال را در جمعیت
ایرانی نشان می دهد. افرادی با ژنوتیپ TT 509- احتمال ابتلای بیشتری به
ریفلاکس وزیکویورترال دارند.
کلید واژه ها:ریفلاکس وزیکویورترال ،PCR-RFLP ، پلی مورفیسم 509- ، ژن TGF-β1
فصل اول:
کلیات تحقیق
1-1 ریفلاکس وزیکویورترال(VUR)
ریفلاکس
وزیکویورترال یک جریان برگشتی ادرار از مثانه به طرف حالبو به سمت کلیه در
اثر اختلال در اتصال وزیکویورتریک است. عملکرد صحیح این اتصال معمولا شبیه
به یک دریچه یک طرفه است که به جریان ادرار اجازه می دهد از حالب به طرف
مثانه حرکت کند و در حین ادرار کاملا بسته شود تا از جریان برگشتی ادرار به
حالب که در اثر فشار حاصل از تخلیه ادرار ممکن است رخ دهد جلوگیری کند.
عملکرد موثر دریچه به عملکرد هماهنگ چندین عامل وابسته است که شامل طول زیر
موکوسی حالب، عرض ورودی حالب، عضلات مثلثی و حالب و حرکات دودی هماهنگ
حالب است شکل2-1 محل اتصال وزیکویورتریک را نشان می دهد.VUR به طور معمول
در حین تخلیه شدن، زمانی که فشار درون مثانه افزایش می یابد تشخیص داده می
شود سیستم مطالعات جهانی ریفلاکس را بر حسب سختی در 5 گروه رتبه بندی کرده
است (شکل1-1) که عواملی مثل طول جریان برگشتی، تورم یا آماس و انحنای حالب
ها در این رتبه بندی دخیل بوده اند، درشکل 4-1 نیز مثال های کلینیکی از این
درجه بندی را میتوانید مشاهده کنید.
شکل1-1 سیستم درجه بندی مطالعه
جهانی ریفلاکس، درجه یک: ادرار تنها به حالب بر می گردد. درجه دو: ادرار به
حالب، لگنچه کلیه و کالیس ها بر می گردد لگنچه سالم به نظر می رسد و کالیس
ها تیز هستند. درجه سه: ادرار به حالب و سیستم جمع آوری بر می گردد حالب و
لگنچه کمی متورم به نظر می رسند و کالیس ها کمی پهن می شوند. درجه چهار:
ادرار به حالب و سیستم جمع آوری بر می گردد حالب و لگنچه به طور متوسط
متورم شده اند و کالیس ها نسبتا پهن هستند. درجه پنج: ادرار به حالب و
سیستم جمع آوری بر می گردد لگنچه شدیدا متورم است حالب پیچ و خم دار به نظر
می رسد و کالیس ها شدیدا پهن شده اند]27[
شکل2-1 اتصال یوترووزیکال ]12[.
1-2 شیوع VUR
VUR
در کودکان معمول است اما شیوع دقیق آن نامعلوم است چرا که جمعیتی با
فراوانی بالا تحت VCUG قرار نگرفته است و مطالعات فراوانی VUR تنها گروه
های کوچکی از کودکان را موردآزمایش قرار داده است اغلب مقاله های مروری
فراوانی حدود یک درصد در کودکان را پیشنهاد کرده اند. از دهه 1980 اغلب
مطالعات، اطفال تازه متولد شده را با تورم دستگاه کلیوی که قبل از تولد با
سونوگرافی مشخص می شوند را مورد آزمایش قرار می دهند. با توجه به آستانه به
کار رفته، معمولا ، 2 تا 6/9 درصد از اطفال متولد شده آماس دارند و از این
ها 3تا 19 درصد VUR دارند که با VCUG تشخیص داده شده اند این بدین معنی
است که بین006/0تا8/1 درصد از اطفال به دنیا آمده VUR دارند. اگرچه، پیش
بینی کردن از روی این اطلاعات مشکل است چراکه این تأیید می کند آماس همیشه
با VUR همراه است و اینکه سونوگرافی همه آماس را نشان می دهد(صد در صد
حساسیت دارد) در حالیکه اینطور نیست]3و24[.
یک گروه دیگر ازکودکان مورد
مطالعه برای VUR آنهایی هستند که در خانواده هایشان VUR یا ریفلاکس
نفروپاتی داشته اند که در این مطالعات تنوع وسیعی (11تا67 درصد) در فراوانی
VUR مشاهده شد. شیوع دقیق VUR در کودکان همچنان مبهم باقی مانده است
احتمال 1درصد محافظه کارانه است و شیوع 10تا 20 درصد می تواند محتمل باشد
که این نشان می دهد VUR به طور وسیعی بدون نشانه است]27[ .
1-3 سبب شناسی VUR
شکلگیری
حالب و کلیهها در روز سی و پنجم شکل گیری جنین انسان با ظهور جوانه حالب
از پایه حفره wollfian بالای سینوس یوروجنیتال(مثانه اولیه) اغاز می شود.
همانطور که جوانه حالب به طرف مزودرم متانفریک(کلیه اولیه) رشد میکند
سیگنالهای متقابل بین ساختارهای القا کننده تمایز ایجاد می شود. مدارکی
نشان می دهند که در حین بلوغ حالبها، مرگ برنامهریزی شده سلول در هدایت و
جایگیری حالب ها درون مثانه نقش مهمی ایفا می کند]4[. در خصوص تکامل
ناهنجاریهای پارانشیمی کلیه و VUR دو نظریه وجود دارد. اولی پیشنهاد میکند
که VUR از استرس های فیزیکی منتج از انسداد و نقص مثانه و اتصال
وزیکویورترال ناشی میشود که این نظریه با توجه به نتایجی که نشان میدهد
انسداد القا شده در جنین حیوانات میتواند به ناهنجاری پارانشیمی کلیوی منتج
شود اما حضور VUR تشخیص داده نشده است بعید است. تئوری دوم پیشنهاد میکند
که جوانه حالب غیرطبیعی و یا میانکنشهای ناقص میان جوانه حالب و مزانشیم
متانفریک به افزایش VUR و سایر ناهنجاریهای کلیوی میانجامد]27[.